HSP70多态性及其蛋白表达量与水牛精液品质相关性的研究

摘要

本研究通过对广西品改站种公牛站44头尼里-拉菲和33头摩拉水牛近年的精液生产数据的分析，探讨品种、气温和年龄对公牛精液品质的影响。采用DNA池PCR的方法筛选尼里-拉菲和摩拉水牛HSP70基因的SNP位点，通过HRM技术进行基因分型，研究碱基突变和公牛精液品质的相关性。进一步对摩拉和尼里-拉菲水牛中不同精子活力的精液进行顶体酶、酸性磷酸酶、α-葡萄糖苷酶活力测定和HSP60和HSP70蛋白含量定性分析，研究了HSP70对公牛精液品质的影响，为研究HSP70在精子中的作用机制和河流型公水牛的选育提供了一定的理论基础。　　试验结果如下:　　1、结果表明，摩拉和尼里-拉菲水牛种公牛的精液在精子活力和采精量方面有显著性的差异(P＜0.05)，尼里-拉菲水牛的精子活力比摩拉水牛高，其采精量要低于摩拉水牛;在尼里-拉菲水牛中，3-5岁种公牛的精子密度和抗冻性能都要显著的高于6-9岁和10-16岁组公牛(P＜0.05)，3-5岁的种公牛的精子抗冻活力显著高于10-16岁的公牛(P＜0.05)，高于6-9岁的公牛但不显著(P＞0.05)。摩拉水牛精液品质的年龄因素影响分析结果显示:3个年龄段水牛种公牛的精子活力、精子冻后活力和采精量都没有显著性的差异，6-9岁的种公牛精子密度和活精子数要显著高于10-16岁组(P＜0.05)。从精子抗冻性方面看，10-16岁组的公牛是最低的，只有0.44，3-5岁的公牛最高，达到了0.47，有显著性的差异(P＜0.05);莫拉和尼里-拉菲水牛的精液品质在冬季（1-3月）是最差的，精子活力显著低于夏季（6-10月）和春秋季（4-5月、11-12月）(P＜0.05)。　　2、在HSP70基因CDS区检测到3个SNP位点，分别是CDs区602bp位点、708bp和1284bp位点，其中602位点为有义突变，导致了甘氨酸→谷氨酸突变，另2处为无义突变。统计分析结果表明:602位点的不同基因型显著影响了摩拉和尼里-拉菲水牛的精子活力，活精子数以及精子抗冻能力(P＜0.05)，但对公水牛采精量和精子密度没有显著性的影响，708位点和1284位点对公牛精液品质无显著性影响(P＞0.05)。　　3、在不同活力的摩拉和尼里-拉菲水牛精液的项体酶、酸性磷酸酶、α-葡萄糖苷酶三种酶活力测定中，高活力组的顶体酶和α-葡萄糖苷酶显著高于低活力组的精液(P＜0.05)，但酸性磷酸酶与精子活力相关性不显著(P＞0.05)。　　4、通过HSP60和HSP70蛋白的Western blotting分析，发现与低活力组相比，高活力组的HSP70蛋白要显著高于低活力组(P＜0.05)，其HSP60蛋白含量无显著性差异(P＞0.05)。

目录

声明

摘要

第一章 综述

1 摩拉和尼里-拉菲水牛简介

2 评价水牛精液品质的指标

2．1 精子活率

2．2 精子质膜的完整性

2．3 精子畸形率

3 影响水牛精液品质的因素

3．1 季节对水牛精液品质的影响

3．2 品种对水牛精液品质的影响

3．3 年龄对水牛精液品质的影响

4 HSP70蛋白对水牛精液品质的影响

4．1 热应激蛋白家族

4．2 SHP70蛋白的功能

5 精液酶活力与精液品质

5．1 顶体酶

5．2 酸性磷酸酶

5．3 精浆弹性蛋白酶

6 本研究的目的和意义

第二章 品种、年龄、气温对摩拉和尼里-拉菲水牛精液品质的影响

1 试验材料

1．1 试验材料

1．2 仪器

1．3 试验试剂

2．试验方法

2．1．精液的采集

2．2 精液品质指标的测定

2．3 数据分析

3 试验结果

3．1 品种对种公牛精液品质的影响

3．2 年龄对种公牛精液品质的影响

3．3 气温对种公牛精液品质的影响

4 讨论

4．1 品种对公牛精液品质的影响

4．2 年龄对公牛精液品质的影响

4．3 气温对公牛精液品质的影响

第三章 HSP70基因多态性与公牛精液品质的相关性分析

1 试验材料

1．1 试验动物

1．2 仪器

1．3 试剂

2 试验方法

2．1 HSP70基因CDs区的克隆

2．2 HSP70基因多态性的检测

2．3 数据处理与分析

3 试验结果

3．1 基因克隆

3．2 摩拉与尼里拉菲水牛HSP70基因CDs区多态性检测结果

3．3 HSP70基因多态性与精液品质相关性分析

4 讨论

第四章 精液品质相关酶活力和蛋白质表达量关系的研究

1．试验材料和仪器

1．1 试验材料

1．2 试剂

1．3 仪器

2 试验方法

2．1 精液酶活力的测定

2．3 总蛋白的提取与相关蛋白Western blot分析

3 试验结果

3．1 精子活力的测定结果

3．2 精液酶活力的测定结果

3．3 Western Blotting分析分析结果

4．讨论

5．2 公牛精液蛋白WB检测

结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文