肿瘤诱导树突状细胞信号网络失调与功能变化关系

摘要

树突状细胞(Dendritic cells，DC)受肿瘤环境影响所致功能异常，被认为是肿瘤免疫逃逸的重要原因。因临床肿瘤相关DC的来源有限，限制了对其所介导的肿瘤免疫逃逸相关机制的研究。
　　本课题利用临床肿瘤患者的血清培养细胞，建立了一套稳定、可靠的体外模拟肿瘤环境诱导DC功能失活的实验模型。利用此模型，对肿瘤血清诱导DC分化及成熟的表型和功能变化进行了系统性的鉴定分析。同时，采用全基因组表达谱芯片及一系列体外实验，分析和鉴定了可能引起细胞功能变化的主要胞内信号网络。
　　研究结果显示，肿瘤血清显著抑制DC抗原吞噬、抗原提呈及细胞因子分泌的能力，导致其无法有效激活抗肿瘤免疫应答。转录组学分析发现，一系列参与DC免疫应答及炎症反应相关基因发生了显著性改变，主要包括:(1)负责DC抗原提呈的MHC-Ⅱ家族;(2) IL-1与IFN-α/β通路上下游分子;(3)细胞因子及趋化因子表达谱等。根据进一步的生物信息学分析和实验验证发现，细胞上游NF-κB经典通路及STAT3通路活化受到干扰可能是导致DC功能失活的主要原因。研究结果强烈提示，肿瘤血清通过同时抑制NF-κB经典通路及STAT3通路，导致一系列下游基因转录调控的改变，干扰了DC的诱导分化及成熟活化。
　　肿瘤环境中包含大量促炎症及抑炎症信号，共同作用于DC并最终展现出对NF-κB经典通路及STAT3通路的抑制效果。同时DC诱导分化及成熟活化过程中胞内多条信号通路间的cross-talk也可能参与了这一过程。本研究利用所建立的体外培养系统，发现肿瘤血清通过抑制NF-κB经典通路及STAT3通路干扰DC诱导分化的分子机制，为进一步研究和揭示肿瘤免疫逃逸的机制提供了基础。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 树突状细胞研究概况

1．1．1 树突状细胞分类与功能

1．1．2 树突状细胞的成熟

1．1．3 树突状细胞分化与成熟的分子调控网络

1．2 肿瘤免疫研究概况

1．2．1 肿瘤免疫编辑

1．2．2 树突状细胞与肿瘤微环境

1．2．3 肿瘤微环境标志物与树突状细胞免疫抑制

1．2．4 免疫抑制性受体

1．2．5 肿瘤影响树突状细胞的实验模型

第2章 结果分析

2．1 肿瘤环境中DC体外诱导分化及活化的体系构建

2．1．1 正常环境中人源Mo-DC体外诱导分化及活化的体系确认

2．1．2 肿瘤环境中DC体外诱导分化及活化的体系构建

2．2 肿瘤环境中DC异常分化的鉴定

2．2．1 细胞形态学改变

2．2．2 细胞凋亡检测

2．2．3 细胞功能鉴定

2．3 肿瘤环境中DC异常分化的生物学通路分析

2．3．1 可靠性验证分析

2．3．2 生物学通路分析

2．4 信号通路验证及分析

2．4．1 NF-κB通路分析

2．4．2 STAr3通路分析

2．4．3 信号通路Cross-talk

第3章 讨论

3．1 研究总结

3．2 研究中存在的问题及期待

3．3 研究的创新点

第4章 附录

4．1 材料与方法

4．1．1 肺癌晚期病人血清样品的处理及保存

4．1．2 健康捐献者血浆处理及保存

4．1．3 健康人外周血液PBMC及单核细胞分离及纯化

4．1．4 DC体外诱导及活化

4．1．5 DC细胞表面分子的流式检测

4．1．6 DC细胞凋亡的流式检测

4．1．7 DC细胞吞噬能力检测

4．1．8 同种异体混合淋巴反应

4．1．9 DC细胞因子分泌及检测

4．1．10 全基因组表达谱芯片检测及分析

4．1．11 RNA抽提及反转录

4．1．12 实时荧光定量PCR

4．1．13 Western Blotting检测信号通路

参考文献

致谢

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