蛭龙活血通瘀胶囊拆方对肾血管性高血压大鼠血管内皮细胞分泌功能的干预研究

摘要

目的：通过对蛭龙活血通瘀胶囊拆方观察对肾血管性高血压大鼠血压、血管内皮细胞分泌功能、炎症反应等的影响，探讨全方及其拆方降压的作用机制，为益气活血通络法治疗高血压病提供理论依据。　　方法：将110只雄性SD大鼠随机分为正常组（12只）、假手术组(12只)、手术组（86只），手术组缩窄左肾动脉，构建二肾一夹(2K1C)型肾血管性高血压大鼠(RVR)模型。筛选模型成功大鼠60只，随机分为模型组、卡托普利组、拆方Ⅰ组（补气组）、拆方Ⅱ组（活血化瘀组）、拆方Ⅲ组（温经通络组）、全方组各10只，分别给予相应药物1次/日灌服，并以相同体积生理盐水灌胃正常组、假手术组、模型组。采用尾动脉搏动法测量大鼠基础血压、手术后2周、手术后6周、治疗2周末及治疗4周末血压。灌胃4周后，大鼠腹主动脉采血，制备血清。采用硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(NO)浓度，放射免疫法测定血清C反应蛋白(CRP)浓度，酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)浓度。取大鼠胸主动脉，一部分免疫组化法(SABC)检测血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的阳性表达;另一部分行HE染色，于光镜下对胸主动脉进行形态学观察并测量中膜厚度。　　结果：⑴对各组大鼠一般情况观察:正常组及假手术组大鼠营养状况良好，毛色洁净富有光泽，饮食正常，性情温和，行动敏捷。模型组大鼠毛色逐渐变黄变硬失去光泽，饮水量增加，形体偏瘦，反应迟钝。拆方Ⅲ组于灌胃1周后出现毛色变黄，烦躁易激，有2只大鼠双眼结膜颜色变红。其余各组均于治疗后毛色逐渐恢复光泽，性情温顺。⑵药物对肾血管性高血压大鼠血压的影响：术前血压:各组大鼠血压值差异无统计学意义；术后2周末及6周末血压:模型组、卡托普利组、拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组、拆方Ⅲ组、全方组血压较术前明显升高，与假手术组、正常组比较有统计学差异(P＜0.05)；灌药2周末血压:正常组、假手术组、模型组血压较灌服生理盐水前基本无变化;与模型组比较，卡托普利组、拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组、全方组血压有下降(P＜0.05），而模型组与拆方Ⅲ组比较，差异无统计学意义；灌药6周末血压:在灌药2周末血压基础上，卡托普利组、拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组、全方组血压持续下降;与模型组比较，除拆方Ⅲ组外，其余各药物干预组血压明显下降（P＜0.05）;与卡托普利组比较，拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组、拆方Ⅲ组血压升高(P＜0.05)，与全方组比较差异无统计学意义;拆方组中，全方组血压下降幅度最大，与其它拆方组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。⑶药物对肾血管性高血压大鼠血管活血物质及炎性物质的影响：血清NO、CRP:假手术组与正常组较其余各组血清NO浓度明显升高，而血清CRP浓度明显降低（P＜0.05）;与模型组比较，除拆方Ⅲ组外，其余各药物干预组血清NO浓度升高、血清CRP浓度明显下降(P＜0.05);与卡托普利组比较，除全方组外，拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组、拆方Ⅲ组血清NO浓度降低明显(P＜0.05)，拆方Ⅰ组较拆方Ⅱ组及拆方Ⅲ组血清NO浓度升高(P＜0.05)。与卡托普利组比较，拆方Ⅰ组、全方组血清CRP浓度降低，差异无统计学意义;就拆方组而言，其中拆方Ⅰ组及全方组较其余各拆方组血清CRP浓度降低明显(P＜0.05)，相比拆方Ⅱ组，拆方Ⅲ组血清CRP浓度明显升高(P＜0.05)；血清ET-1、AngⅡ:正常组、假手术组血清ET-1、AngⅡ浓度明显低于其他六组(P＜0.05);与模型组比较，除拆方Ⅲ组外，其余各药物干预组血清ET-1、AngⅡ浓度明显降低(P＜0.05);拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组相比卡托普利组血清ET-1、AngⅡ浓度升高(P＜0.05)，而卡托普利组与全方组则无统计学差异。拆方组中，全方组明显低于其拆方各组(P＜0.05);拆方Ⅰ组血清ET-1、AngⅡ浓度较拆方Ⅱ组、拆方Ⅲ组明显降低(P＜0.05)。⑷药物对肾血管性高血压大鼠胸主动脉中AT1R表达的影响:光镜下，AT1R在正常组和假手术组中少量表达，而在模型组、拆方Ⅲ组中大量表达;卡托普利组、拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组、全方组阳性表达略有增加。假手术组与正常组AT1R阳性表达明显低于其余6组(P＜0.05);与模型组比较，除与拆方Ⅲ组比较无统计学意义外，其余各药物干预组AT1R阳性表达均减少(P＜0.05);卡托普利组对比拆方Ⅰ组与拆方Ⅱ组AT1R阳性表达明显减少（P＜0.05）;就拆方组而言，全方组的AT1R阳性表达明显低于其余各组(P＜0.05);拆方Ⅱ组、拆方Ⅲ组较拆方Ⅰ组AT1R阳性表达明显升高(P＜0.05)。⑸药物对肾血管性高血压大鼠胸主动脉中膜的影响:光镜下:正常组和假手术组中膜血管平滑肌细胞(VSMC)细长呈梭行，排列整齐，胞核蓝染;模型组和拆方Ⅲ组胸主动脉中膜增厚，VSMC排列不规则且细胞核数量增加;卡托普利组、拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组、全方组可见中膜略有增厚，VSMC排列欠规则，细胞核数量略增多。与正常组、假手术组比较，其余各组中膜均明显增厚(P＜0.05);与模型组比较，除拆方Ⅲ组外，其余各药物干预组胸主动脉中膜厚度均显著降低(P＜0.05);全方组较其余拆方组相比中膜厚度降低(P＜0.05)，而与卡托普利组的差异无统计学意义。拆方组中，全方组中膜厚度低于其拆方(P＜0.05);与拆方Ⅰ组比较，拆方Ⅱ组和拆方Ⅲ组均升高(P＜0.05);拆方Ⅱ组中膜厚度较拆方Ⅲ组降低(P＜0.05)。　　结论：①蛭龙活血通瘀胶囊全方及拆方Ⅰ组（补气组）、拆方Ⅱ组（活血化瘀组）能明显降低肾血管性高血压大鼠血压，对肾血管性高血压有良好的治疗作用，降压效果为全方组＞拆方Ⅰ组＞拆方Ⅱ组，拆方Ⅲ组无降压功效。②蛭龙活血通瘀胶囊全方及拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组对肾血管性高血压大鼠的降压作用机制可能通过以下途径：对血管活血物质进行调控，增加NO的释放以增强舒血管的活性，减少ET-1的释放降低血管收缩活性，从而保护血管内皮细胞功能；降低CRP的生成，缓解炎症状态，改善血管内皮功能；通过减少AngⅡ的生成，降低其作用受体AT1R的表达；减少平滑肌细胞的增殖肥大降低中膜厚度，抑制血管重构。③蛭龙活血通瘀胶囊补气、活血化瘀、温经通络在治疗肾血管性高血压大鼠方面具有协同作用，合用可增效降压。

目录

摘要

前言

材料和方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 标本采集与处理

6 指标检测

结果

1 一般情况及行为学的观察

2 药物对肾血管性高血压大鼠血压的影响

3 药物对肾血管性高血压大鼠血清舒血管活血物质NO、炎性物质CRP的影响

4 药物对肾血管性高血压大鼠血清中缩血管活血物质ET-1和Ang Ⅱ的影响

5 药物对肾血管性高血压大鼠胸主动脉AT1R阳性表达的影响

6 药物对肾血管性高血压大鼠胸主动脉中膜的影响

讨论

1 “气虚血瘀、瘀血阻络”是高血压病的病机关键

2 “益气活血、通络祛邪”是高血压病的重要治法

3 蛭龙活血通瘀胶囊及其拆方详解

4 实验结果讨论与分析

结论

参考文献

英文缩略词对照表

致谢

顽固性高血压之中西医研究进展 综述

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