环孢菌素A通过结合Cyp抑制mPTP开放对大鼠实验性脑出血的作用及其机制研究

摘要

目的:环孢菌素A(CsA)通过结合亲环蛋白D(CYPD)抑制线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放，维持线粒体内稳态和阻止凋亡诱导因子释放，从而抑制细胞的坏死和凋亡，改善神经功能评分。本研究旨在探讨环孢菌素A对大鼠实验性脑出血的凋亡和坏死信号通路的影响。　　方法:1.实验分组:240只雄性SD大鼠(280g-330g)随机分为Sham组(n=48)、ICH组(n=48)、ICH+Vehicle(n=48)、ICH+CsA5mg组(n=48)、ICH+ CsA10mg组(n=48)五个组。2.模型制作及药物处理:大鼠脑出血模型是右侧基底节区注射0.1ml自体全血（坐标:囟门前0.2毫米，旁3.5毫米和腹侧深5.5毫米）。药物处理组是术后15min经尾静脉注射给药，后每天一次。3.神经功能评分:采用华娅教授评分法进行评分，分值越高代表神经功能损害越轻，反之，损伤越重。4.脑水含量检测及脑水肿观察:脑出血后24h用干湿重法检测脑水含量。脑出血后24h用MRI检测脑水肿情况。5.血脑屏障检测:脑出血后24h用伊文思蓝法检测血脑屏障通透性。6.细胞凋亡检测:脑出血后72h用TUNEL法检测细胞凋亡。7.细胞坏死检测:脑出血后72h用PI法检测细胞坏死。8.免疫荧光检测:脑出血后72h用免疫荧光检测CypD、AIF及核AIF蛋白变化情况。9.免疫印记检测:脑出血后24h用免疫印记法检测CypD、AIF及核AIF蛋白表达。10.线粒体观察:脑出血后72h电镜观察线粒体形态变化。11.细胞形态观察:脑出血后7d用NISSL染色和HE染色检测细胞形态结构。12.统计分析:采用SSPS17.0软件，结果均以(x)±s表示，采用单因素方差分析，组间比较用Student's检验分析的方法，P＜0.05为显著性标准。　　结果:1.脑出血后72h神经功能评分显著较Sham组差(p＜0.01)，CsA治疗组较ICH组(p＜0.01)、ICH+Vehicle组(p＜0.01)显著改善。2.脑出血后24h脑水含量显著较Sham组增加(p＜0.01)，ICH+CsA5mg组、ICH+ CsA10mg组较ICH组(p＜0.01)、ICH+Vehicle组(p＜0.01)显著降低。脑出血后24h行MRI扫描示脑水肿显著增强，治疗组显著减轻。3.脑出血后24h血脑屏障通透性较Sham组显著破坏(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg组较ICH组、ICH+CsA5mg组显著改善(p＜0.01)。4.脑出血后72h凋亡细胞数较Sham组显著增加(p＜0.01)，ICH+CsA10mg组较ICH组、ICH+CsA5mg组凋亡细胞数显著减少(p＜0.01)，ICH+CsA5mg组较ICH+ CsA10mg组凋亡细胞数显著增多(p＜0.01)。5.脑出血后72h坏死细胞数显著较Sham组多(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg组较ICH组(p＜0.01)、ICH+CsA5mg组(p＜0.01)坏死细胞数显著减少，ICH+CsA5mg组较ICH+ CsA10mg组坏死细胞数显著增多(p＜0.01)。6.脑出血后24h用免疫印记法检测CypD、AIF及核AIF蛋白表达较Sham组显著增加(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg组较ICH组(p＜0.01)、ICH+CsA5mg组(p＜0.01)显著降低。7.脑出血后72h线粒体水肿明显，ICH+CsA5mg组、ICH+ CsA10mg组线粒体水肿好转。8.脑出血后7d细胞衰减明显，ICH+CsA5mg组、ICH+CsA10mg组细胞形态发生改变且细胞数目未见显著衰减。　　结论:在ICH模型中，CsA能够降低脑水含量和减轻早期脑水肿，改善早期血脑屏障通透性。CsA能够结合CypD，抑制AIF释放和核转位，阻止mPTP开放，保护线粒体内稳态，抑制细胞凋亡和坏死，改善EBI，提高神经功能评分。

目录

摘要

前言

实验材料与实验方法

1．实验仪器

2．实验试剂

3．实验方法

实验结果

1．大鼠脑出血后神经功能恢复状况比较

2．术后MRI检查

3．脑水含量检测

4．术后24h伊文思蓝比较

5．术后24hCypD和AIF表达定量变化

6．术后72h血肿周边组织(CypD、AIF)表达的比较

7．术后72h电镜观察线粒体形态

8．术后72h血肿周边组织细胞坏死比较

9．术后72h血肿周边组织细胞凋亡比较

10．HE染色细胞形态学观察

11．NISSL染色细胞形态学观察

讨论

结论

参考文献

英汉缩略名词对照表

致谢

综述 线粒体膜通透性在神经元损伤的研究进展

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