河南华溪蟹piwi基因的克隆和原核表达

目录

第一章 文献综述

1.1 Argonaute蛋白家族的研究现状

1.1.1 AGO蛋白亚家族

1.1.2 PIWI蛋白亚家族

1.2 piwi的研究现状

1.2.1 piwi的结构

1.2.2 piwi基因的生物学功能

1.3 本研究的目的与意义

第二章 河南华溪蟹 piwi基因的克隆

2.1 实验材料与试剂

2.1.2实验试剂

2.1.3实验仪器

2.2实验方法

2.2.1 RNA的提取与 cDNA第一链的合成

2.2.2引物设计

2.2.3 piwi基因分段扩增序列的获得

2.2.4 PCR产物纯化

2.2.5 重组质粒的连接及转化

2.2.6 挑取单克隆及检测

2.2.7 系统进化树构建

2.2.8 生物信息学分析

2.3实验结果

2.3.1 河南华溪蟹 piwi基因的克隆

2.3.2 河南华溪蟹 piwi基因的序列分析

2.3.3河南华溪蟹ShPIWI理化特性分析

2.3.4河南华溪蟹 ShPIWI蛋白的序列和结构分析

2.3.5河南华溪蟹 ShPIWI的系统进化树分析

2.4讨论

第三章 河南华溪蟹PIWI融合蛋白表达载体构建和表达

3.1实验材料

3.1.2实验试剂

3.1.3实验仪器

3.1.4 SDS-PAGE分析所用试剂

3.2 实验方法

3.2.1总RNA提取和 cDNA第一链的合成

3.2.2引物设计

3.2.3 PCR扩增及产物纯化

3.2.4 阳性克隆检测和质粒提取

3.2.5 T载体双酶切及胶回收

3.2.6 pET-32a双酶切及胶回收

3.2.7 原核表达载体构建及检测

3.2.10 SDS-PAGE检测

3.3 实验结果

3.3.1 目的片段的获得和 pET-32a酶切反应

3.3.2 T载体酶切反应和表达载体构建

3.3.3融合蛋白 SDS-PAGE检测

3.4讨论

第四章 总结与展望

参考文献

致谢

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