基于红色荧光蛋白的活性硫烷硫检测探针的设计、构建与应用

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第一章绪论

2活性硫烷硫

2．1硫代硫酸盐

2．2多硫化物

3已有的活性硫烷硫检测方法

3．1氰化物法

3．2化学荧光探针法

3．3 mBBr衍生法

3．4荧光同步光谱扫描法

3．5基于绿色荧光蛋白构建的比率荧光探针

4荧光蛋白

4．1绿色荧光蛋白

4．2红色荧光蛋白

5本文的主要研究内容

第二章基于红色荧光蛋白mCherry的活性硫烷硫检测探针的开发

1引言

2实验材料

2．1本章所用菌株和质粒

2．2本章所用引物

2．3本章所用试剂／试剂盒

2．4本章所用仪器设备

2．5本章所用试剂的配方

3实验方法

3．4蛋白的诱导表达及提纯

3．5酿酒酵母BY4742的化学转化法(醋酸锂转化法)

3．7基于mCherry的多硫化物敏感探针的突变设计及构建

3．8psRFP的体外检测

3．9psRFP的体内检测

4实验结果

4．2psRFP的构建及光谱特性检测

4．3psRFP分别用HSnH和DTT处理后的LS-MS／MS分析

4．4psRFP的体外检测

4．5psRFP的体内检测

5讨论

6本章小结

第三章基于远红荧光蛋白mKelly1的活性硫烷硫检测探针的开发

1引言

2实验材料

2．1本章所用菌株和质粒

2．2本章所用引物

2．3本章所用试剂／试剂盒

2．4本章所用仪器设备

2．5本章所用试剂的配方

3实验方法

3．1基于mKelly1的多硫化物敏感探针的突变设计及构建

3．2psFRFP的体外检测

3．3psFRFP的体内检测

3．5GFP-psFRFP在酿酒酵母BY4742中的应用

4实验结果

4．1基于mKelly1的多硫化物敏感远红荧光探针(psFRFP)的设计

4．2psFRFP的构建及光谱特性检测

4．3psFRFP的体外检测

4．4psFRFP的体内检测

4．5构建GFP-psFRFP并绘制其标准曲线

4．6GFP-psFRFP在酿酒酵母BY4742细胞中的应用

5讨论

6本章小结

参考文献

1总结与创新点

2不足之处及展望

致谢

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