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摘要
缩略词
第一章前言
1．1线虫简介
1．2线虫的防治方法
1．2．1传统防治方法
1．2．2线虫的生物防治
1．3生防菌的人工改造
1．3．1娄彻氏链霉菌D74的研究进展
1．3．2阿维菌素研究进展
1．3．3多杀菌素研究进展
1．4生防菌改造的优化策略
1．4．1生物合成途径的优化
1．4．2基因簇的重构
1．5生防菌改良的技术
1．5．1Red／ET重组工程
1．5．2位点特异性重组
1．6立题依据和意义
2．1实验材料
2．1．1本文所用菌株及质粒
2．1．2本文所用培养基及抗生素
2．1．3本文所用分子生物学试剂及化学试剂
2．1．4本文所涉及的引物名称及DNA碱基序列，分析软件
2．1．5设备仪器
2．2实验方法
2．2．1Streptomyces avermitilis基因组的提取方法
2．2．2本文所使用的PCR方法
2．2．3Red／ET DNA同源重组方法
2．2．4构建直接克隆载体
2．2．5ExoCET直接克隆技术克隆阿维菌素生物合成基因簇
2．2．6质粒的小量提取及大量提取方法
2．2．7质粒的酶切鉴定体系及琼脂糖凝胶电泳检测方法
2．2．8Redαβ同源重组技术添加位点特异性重组元件方法
2．2．9接合转移方法
2．2．10菌落PCR方法
2．2．11目标菌株发酵方法及发酵产物的粗提
2．2．12代谢物HPLC-MS检测方法
2．2．13ExoCET体外多片段组装方法
第三章实验结果与分析
3．1阿维菌素原始基因簇在Streptomyces rochei D74中的异源表达
3．1．1Streptomyces rochei D74接合转移方法的建立
3．1．2阿维菌素生物合成基因簇的克隆
3．1．3阿维菌素原始基因簇的异源表达
3．2阿维菌素生物合成途径的优化
3．2．1阿维链霉菌来源的硫酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因重组BAC的构建
3．2．2优化后阿维菌素基因簇的异源表达
3．3 阿维菌素基因簇的重构
3．3．2重构阿维菌素基因簇的异源表达
3．4阿维菌素原始基因簇的改造
3．5多杀菌素高效基因簇在Streptomyces rochei D74中的异源表达
第四章实验讨论与展望
4．1讨论
4．2展望
参考文献
致谢
山东大学;
