梨PbrS7--RNase互作蛋白筛选及其解聚花粉微丝骨架分子机制的研究

目录

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摘要

缩略词

第一章文献综述

1．2花柱S-RNase的结构和功能

1．3非S因子的发现

1．4微丝骨架与SI反应

1．5植物先天免疫与SI反应

1．6本研究的目的与意义

第二章PbrS-RNase解聚花粉微丝骨架的分子机制

2．1材料和方法

2．1．1植物材料

2．1．2花粉培养

2．1．3基因克隆与载体构建

2．1．4蛋白表达、纯化

2．1．6花粉管体内F-actin成像和相对含量检测

2．1．7体外微丝成像与动态解聚的观察

2．1．8全内反射荧光显微镜监测F-actin解聚

2．1．9梨花粉管PCD的观察

2．1．10数据统计分析

2．2结果与分析

2．2．2重组S-RNase对花粉管微丝骨架的影响

2．2．3S-RNase的RNase活性位点和RC4区域3个保守位点的突变对S-RNase活性影响

2．2．4四个S-RNase基因点突变蛋白对于花粉管微丝骨架的影响

2．2．5PbrS-RNase诱导的细胞骨架的解聚与RNase活性无关

2．3讨论

第三章梨S-RNase花粉互作蛋白DEFL基因家族分析

3．1材料与方法

3．1．1植物材料

3．1．2花粉培养

3．1．4PbrDEFLs荧光定量表达分析

3．1．5亚细胞定位

3．1．6PbrDEFL38与PbrDEFL15的重组蛋白的表达与纯化

3．2结果与分析

3．2．3‘砀山酥梨’与‘黄花’花粉发育过程中DEFL基因表达变化

3．2．4PbrDEFL38和PbrDEFL15亚细胞定位

3．2．5PbrDEFL38和PbrDEFL15蛋白体外表达

3．3讨论

第四章梨S-RNase花柱互作蛋白TLP基因家族分析

4．1材料和方法

4．1．1植物材料

4．1．2花粉培养

4．1．5梨TLP基因家族定量表达分析

4．1．6亚细胞定位

4．1．7酵母双杂交试验

4．1．8荧光素酶互补试验

4．2结果与分析

4．2．1梨TLP家族成员的筛选

4．2．2梨TLP家族系统发育分析、基因结构与MEME分析

4．2．3梨TLP家族基因的染色体定位与进化模式分析

4．2．4梨TLP家族基因的启动子分析

4．2．5梨TLP家族基因表达分析

4．2．6梨TLP18的亚细胞定位

4．2．7梨TLP18与S7-RNase的互作

4．3讨论

综合讨论

全文结论

创新点

附录

参考文献

已发表和待发表文章

致谢