三种微生物农药对棉铃虫V--ATPase V1结构域各亚基的影响

目录

声明

致谢

摘要

1文献综述

1．1短稳杆菌、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌在农业生产上的应用

1．1．1短稳杆菌及其在农业生产上的应用

1．1．2绿僵菌及其在农业生产上的应用

1．1．3球孢白僵菌及其在农业生产上的应用

1．1．4三种微生物农药目前研究存在的问题及研究前景

1．2V-ATPase相关研究

1．2．2V-ATPase的功能

1．2．3V-ATPase在昆虫上的研究进展

1．3基因编辑相关研究

1．3．1锌指核酸酶(ZFNs)技术

1．3．2RNA干扰(RNAi)技术

1．3．3转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术

1．3．4CRISPR／Cas9系统介导的基因组编辑技术

2引言

3材料与方法

3．1．1实验材料

3．1．2实验方法

3．2棉铃虫V-ATPase C、D、G亚基的克隆

3．2．1实验材料

3．2．2实验方法

3．3棉铃虫V-ATPase C、D、G亚基的敲除及检测

3．3．1实验材料

3．3．2实验方法

3．4突变体棉铃虫卵V-ATPase V1结构域各亚基的表达量检测

3．4．1实验材料

3．4．2实验方法

4结果与分析

4．1．1短稳杆菌、金龟子绿僵菌和球孢白僵菌对棉铃虫室内毒力测定结果

4．1．2棉铃虫不同处理总RNA的提取

4．1．3LC50三种微生物农药处理后棉铃虫V-ATPase V1结构域各亚基表达量分析

4．2棉铃虫V-ATPase C、D、G亚基的克隆

4．2．1棉铃虫总RNA的提取

4．2．2棉铃虫V-ATPase C、D、G亚基的克隆

4．2．3测序结果与分析

4．3棉铃虫V-ATPase C、D、G亚基的敲除

4．3．1sgRNA体外转录模板的制备和sgRNA的体外转录

4．3．3棉铃虫V-ATPase C、D、G亚基突变体序列比对

4．4棉铃虫V-ATPase C、D、G亚基突变体内V-ATPase V1结构域各亚基表达量

4．4．2C亚基敲除后突变体内V-ATPase V1结构域各亚基表达量

4．4．3D亚基敲除后突变体内V-ATPase V1结构域各亚基表达量

4．4．4G亚基敲除后突变体内V-ATPase V1结构域各亚基表达量

5结论与讨论

参考文献