声明
致谢
摘要
第一章文献综述
1．1颗粒细胞研究进展
1．1．1颗粒细胞在卵泡发育中的作用
1．1．2颗粒细胞与优势卵泡发育
1．1．3颗粒细胞与卵泡闭锁
1．2CTSB基因研究进展
1．2．1组织蛋白酶
1．2．2组织蛋白酶B的结构特征
1．2．3组织蛋白酶B的合成过程
1．2．4CTSB基因功能
1．3CTSS基因研究进展
1．3．2组织蛋白酶S功能研究
1．3．3组织蛋白酶S参与各种病理生理过程
1．4本研究的目的和意义
第二章家兔CTSB／CTSS基因CDS区克隆与组织表达分析
2．1材料与方法
2．1．1试验与材料
2．1．2试验试剂
2．1．3试验仪器
2．1．4引物设计
2．1．6第一链c DNA的合成
2．1．7设计引物PCR克隆家兔CTSB／CTSS基因
2．1．8目的片段切胶回收
2．1．9目的基因的连接和转化
2．1．10组织表达分析
2．1．11数据分析
2．2结果
2．2．1组织总RNA的提取
2．2．2家兔CTSB／CTSS基因CDS区的克隆
2．2．3CTSB／CTSS基因在家兔不同组织中的表达
2．3讨论
2．4小结
第三章家兔原代卵巢颗粒细胞的分离、纯化及鉴定
3．1材料与方法
3．1．1试验材料
3．1．2试验试剂
3．1．3试验仪器
3．1．6家兔颗粒细胞FSHR免疫荧光
3．2结果
3．2．1家兔颗粒细胞分离后不同时间细胞状态
3．2．2家兔颗粒细胞分离培养不同代数细胞形态学变化
3．2．3家兔颗粒细胞形态学鉴定
3．2．4家兔颗粒细胞FSHR免疫荧光鉴定
3．3讨论
3．4小结
第四章家兔CTSB／CTSS重组腺病毒及siRNA的制备及效果验证
4．1材料与方法
4．1．1试验材料
4．1．2试验试剂
4．1．3试验仪器
4．1．4引物设计
4．1．5质粒转化及阳性克隆鉴定
4．1．6质粒载体制备
4．1．7腺病毒包装与扩增
4．1．8腺病毒病毒纯化与滴度检测
4．1．9家兔CTSB／CTSS基因干扰序列设计与合成
4．1．10小干扰RNA片段及干扰效率检测
4．1．11总RNA提取
4．1．12RT-qPCR
4．2结果与分析
4．2．2pAd-CTSS／pAd-CTSB重组腺病毒的包装、扩增及滴度测定
4．2．3Ad-CTSS／Ad-CTSB超表达效果检测
4．2．4CTSB／CTSS基因小RNA干扰片段及效率检测
4．3讨论
4．4小结
第五章CTSB／CTSS基因对家兔卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及激素分泌的调控作用
5．1材料与方法
5．1．3试验仪器
5．1．4引物设计
5．1．5家兔颗粒细胞的分离
5．1．6总RNA提取
5．1．7RT-qPCR
5．1．8CTSB／CTSS基因过表达干扰处理后Western blot检测蛋白
5．1．10CTSB／CTSS基因过表达干扰处理后颗粒细胞活性检测
5．1．11CTSB／CTSS基因过表达干扰处理后颗粒细胞凋亡检测
5．1．12数据分析
5．2结果与分析
5．2．1CTSB与颗粒细胞凋亡的关系
5．2．2CTSB／CTSS过表达效率和siRNA干扰
5．2．3CTSB／CTSS可促进家兔GCS中黄体酮和雌二醇的分泌
5．2．4CTSB／CTSS促进家兔GCS的细胞增殖活性
5．2．5CTSB／CTSS基因可降低家兔GCS的细胞凋亡
5．3讨论
5．4小结
全文总结
创新点
下一步研究
硕士期间发表的文章
参考文献
河南农业大学;
