miR--215--5p调控固始鸡腹部前脂肪细胞增殖和分化的作用及其介导的ceRNA鉴定

目录

声明

致谢

论文说明

摘要

1．文献综述

1．1鸡腹脂沉积研究进展

1．1．2脂肪沉积的影响因素

1．1．3脂肪沉积对鸡生产性能的影响

1．2．miRNA在脂类代谢中的作用

1．2．1miRNA的形成概述

1．2．2miRNA的生物学功能

1．2．3miRNA对脂肪代谢的调节

1．3环状RNA在脂类代谢中的作用

1．3．1环状RNA的形成方式

1．3．2环状RNA的生物学功能

1．3．3环状RNA对脂类代谢的调节

1．4miR-215-5p研究进展

1．5本研究的目的和意义

2．miR-215-5p在固始鸡腹部前脂肪细胞增殖和分化中的作用研究

2．1材料方法

2．1．1试验动物

2．1．2主要试验试剂

2．1．3主要试验仪器

2．1．4主要试剂配制

2．1．5固始鸡腹部前脂肪细胞分离和培养

2．1．6前脂肪细胞的诱导分化

2．1．7细胞转染

2．1．8细胞增殖检测

2．1．9油红O染色和甘油三脂检测

2．1．10细胞RNA的提取

2．1．11qRT-PCR分析

2．1．12数据分析

2．2结果与分析

2．2．2miR-215-5p抑制鸡前脂肪细胞增殖

2．2．3miR-215-5p抑制鸡前脂肪细胞分化

2．3讨论

2．4小结

3．miR-215-5p在固始鸡腹部前脂肪细胞中的靶基因鉴定

3．1材料与方法

3．1．1试验材料及试剂

3．1．2主要仪器

3．1．3miR-215-5p靶基因的预测与筛选

3．1．4载体构建

3．1．5双荧光素酶报告基因相对活性检测

3．1．6数据分析

3．2结果与分析

3．2．2miR-215-5p与潜在靶基因的互作验证

3．2．3过表达／干扰miR-215-5p对NCOA3基因相对表达量的影响

3．3讨论

3．4小结

4．固始鸡腹脂发育相关环状RNA表达谱特征及miR-215-5p介导的ceRNA鉴定

4．1材料与方法

4．1．1样品的采集和总RNA的提取

4．1．2文库构建和序列分析

4．1．3环状RNA的鉴定

4．1．4差异表达环状RNA分析

4．1．5环状RNA潜在功能分析

4．1．7环状RNA的验证

4．2结果与分析

4．2．1文库测序与质量评估

4．2．2环状RNA的鉴定

4．2．3腹脂沉积过程环状RNA表达特征

4．2．4差异表达环状RNA来源基因GO和KEGG通路富集分析

4．2．5环状RNA上的miRNA靶点分析

4．2．6环状RNA的内部核糖体进入位点(IRES)预测

4．2．7腹脂沉积相关的circRNA-miRNA-mRNA互作网络和miR-215-5p介导的ceRNA

4．3讨论

4．4小结

5．gga_circ_0002520-miR-215-5p-NCOA3 ceRNA验证

5．1材料与方法

5．1．1试验材料及试剂

5．1．2主要仪器

5．1．3环状RNA的验证

5．1．4载体构建

5．1．5双荧光素酶报告基因相对活性检测

5．1．6数据分析

5．2结果与分析

5．2．3 gga_circ_0002520对Rnase R酶抗性验证

5．2．4 gga_circ_0002520与miR-215-5p互作关系验证

5．2．5 gga_circ_0002520-miR-215-5p-NCOA3 ceRNA鉴定

5．3讨论

5．4小结

6．结论、创新点和进一步研究工作

6．1结论

6．2创新点

6．3进一步研究计划

参考文献