禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

目录

声明

致谢

英文缩略表

摘要

1．文献综述

1．1禽腺病毒

1．1．1禽腺病毒的分类

1．1．2禽腺病毒分子生物学特征

1．1．3FAdV-4基因组结构及主要蛋白

1．1．4FAdV-4的流行病学与致病性

1．1．5FAdV-4检测方法

1．2单克隆抗体技术以及抗原表位的研究

1．2．1单克隆抗体技术的发展

1．2．2T细胞和B细胞抗原表位

1．2．3线性表位鉴定方法

1．2．4构象表位鉴定方法

1．3展望

2．引言

3．材料与方法

3．1．1质粒、菌株、细胞及毒株

3．1．2细胞培养

3．1．3试验小鼠

3．1．4主要试剂和耗材

3．1．5主要抗体

3．1．6主要仪器设备

3．1．7常规生化试剂的配制

3．2试验方法

3．2．1重组质粒的构建

3．2．2重组蛋白的选择

3．2．3重组蛋白和标签蛋白的纯化

3．2．4Western blot分析纯化得到的NusA-Fiber2蛋白、NusA蛋白

3．2．5Western blot鉴定重组蛋白NusA-Fiber2识别FAdv-4的特异性

3．2．6小鼠免疫

3．2．7间接ELISA检测方法的建立

3．2．8免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay，IPMA)

3．2．9细胞融合及杂交瘤细胞筛选

3．2．10腹水的制备、MAb的纯化和标记

3．2．11单克隆抗体生物学特性分析

3．2．12单克隆抗体的间接免疫荧光(IFA)检测

3．2．13单克隆抗体的Western blot鉴定

3．2．14单克隆抗体的体外中和试验

3．2．15双抗体夹心ELISA检测方法的初步应用

3．2．16抗原表位筛选

4结果与分析

4．1重组质粒的双酶切鉴定

4．2重组蛋白的诱导表达及可溶性分析结果

4．3重组蛋白的纯化及Western blot鉴定结果

4．4间接ELISA方法的建立

4．5间接ELISA方法、IPMA方法检测免疫小鼠血清中抗Fiber2抗体

4．6杂交瘤细胞株的筛选

4．7抗FAdV-4 Fiber2单克隆抗体的获得

4．8单克隆抗体生物学特性分析

4．9抗FAdV-4 Fiber2单克隆抗体特异性分析

4．10单克隆抗体的体外中和试验

4．11双抗体夹心法ELISA分析

4．12MAb 2G5的抗原表位鉴定

5讨论与结论

5．1讨论

5．2结论

参考文献