声明
第1章 引言
1. 1蛋白质工程概述
1.1.1非理性设计
1.1.2半理性设计
1.1.3 理性设计
1.2 蛋白质空间结构
1.2.1蛋白质空间结构的组成
1.2.2 蛋白质空间结构的预测
1.2.3 蛋白质模型的分子对接
1.3α-L-鼠李糖苷酶
1.3.1α-L-鼠李糖苷酶简介
1.3.2α-L-鼠李糖苷酶理化性质
1.3.3α-L-鼠李糖苷酶催化机理及晶体结构
1.4 研究背景与意义
1.5 研究主要内容
1.5.1 塔宾曲霉α-L-鼠李糖苷酶的结构模型构建及序列分析
1.5.2 结构域替换重组子的构建和研究
1.5.3 重组酶的酶学性质研究及结构域功能分析
第2章 塔宾曲霉α-L-鼠李糖苷酶序列分析及同源建模
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 塔宾曲霉α-L-鼠李糖苷酶序列
2.2.2 应用软件与在线工具
2.2.3 分析数据库与服务器
2.2.4 塔宾曲霉α-L-鼠李糖苷酶同源建模
2.2.5 模型的建立及优化
2.2.6 模型的评价
2.2.7 分子对接
2.2.8 塔宾曲霉α-L-鼠李糖苷酶与白曲霉α-L-鼠李糖苷酶序列分析
2.2.9 酶活性分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 塔宾曲霉α-L-鼠李糖苷酶二级结构及结构域分析
2.3.2 多模板建模模板搜索结果
2.3.3 多模板建模及优化
2.3.4 模型评价
2.3.5 分子对接
2.3.6 同源性分析
2.3.7 序列特性分析
2.3.8 理化特性预测
2.3.9 酶活比较
2.4 小结
第3章 结构域重组改变塔宾曲霉α-L-鼠李糖苷酶的酶活性
3.1引言
3.2材料与方法
3.2.1菌种与质粒
3.2.2试剂和仪器
3.2.3实验方法
3.3 结果与讨论
3.3.1 结构域互换位点的确定
3.3.2 AK-rhaαT重组质粒的构建
3.3.3 AK-rhaαT重组子的真核表达
3.3.4重组酶AK-rhaαT酶学性质分析
3.4本章小结
第4章 结构域βT1和βT2的替换及表达
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 材料与仪器
4.2.2 实验方法
4.3 结果与讨论
4.3.1 AK-rhaαTβT1及AK-rhaαTβT2重组子三维结构模型构建及评分
4.3.2 AK-rhaαTβT1及AK-rhaαTβT2重组子质粒的构建
4.3.3 AK-rhaαTβT1和AK-rhaαTβT2重组子的真核表达
4.3.4 AK-rhaαTβT1及AK-rhaαTβT2重组酶的酶活测定及动力学分析
4.4 本章小结
第5章 重组α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.3 结果与讨论
5.3.1 pH对重组酶酶活力及稳定性分析
5.3.2 温度对重组酶酶活力及稳定性分析
5.3.3 重组酶的底物特异性分析
5.3.4 重组酶氨基酸残基作用力分析
5.4 本章小结
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
集美大学;
