声明
前言
1.1枯草芽胞杆菌简介
1.2枯草芽胞杆菌的应用
1.2.1 枯草芽胞杆菌在农业中的应用
1.2.2 枯草芽胞杆菌作为益生菌
1.2.3 枯草芽胞杆菌作为蛋白异源表达宿主
1.2.4枯草芽胞杆菌在污水处理方面的作用
1.3枯草芽胞杆菌的水平基因转移及质粒转化
1.3.1细菌的水平基因转移现象简介
1.3.2细菌的水平基因转移及其机制阐述
1.3.3影响枯草芽胞杆菌转化效率的因素
1.3.4枯草芽胞杆菌的质粒转化及水平转移方法
1.4本研究的目的和意义
第二章 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株和质粒
2.1.2 引物及用途
2.1.3 实验所用仪器
2.1.4 实验试剂
2.1.5培养基和相关溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1细菌质粒提取与phi29 DNA聚合酶扩增质粒
2.2.2提取枯草芽胞杆菌中的基因组
2.2.3聚合酶链式扩增反应(PCR)
2.2.4酶切、回收、连接等相关操作
2.2.5制备大肠杆菌感受态的及转化的方法
2.2.6制备枯草芽胞杆菌二步法感受态及转化的方法
2.2.7制备枯草芽胞杆菌的电转化感受态及电转的方法
2.2.8构建克隆和敲除载体
2.2.9枯草芽胞杆菌细胞间质粒水平转移实验
第三章 实验结果
3.1 用phi29 DNA聚合酶扩增质粒的产物转化枯草芽胞杆菌
3.1.1不同质粒与其RCA产物的二步法转化尝试
3.1.2长度不同的质粒及其RCA产物二步法转化比较
3.1.3质粒及其RCA产物二步法转化野生枯草芽胞杆菌
3.1.4来源不同的phi29 DNA聚合酶扩增产物转化效果的比较
3.1.5原始质粒及其RCA产物的电转与二步法比较
3.1.6质粒及其RCA产物电转法转化野生枯草芽胞杆菌
3.1.7小结与讨论
3.2 枯草芽胞杆菌细胞间质粒水平转移的研究
3.2.2探究同一个质粒框架、不同的转化压力对转化效果的影响
3.2.3探究供体中目的质粒大小对转化的影响
3.2.4探究供受体混合最佳菌体比范围
3.2.5探究共培养不同时间下转化子数目变化趋势
3.2.6细胞间质粒水平转移优化体系的普遍性验证
3.2.7小结与讨论
总结与展望
参考文献
硕士研究生期间所发表论文
致谢
武汉大学;
