环境雌激素的时间分辨荧光免疫分析新方法研究

摘要

环境雌激素是环境内分泌干扰物最重要的一类物质。这类物质进入机体后,通过干扰体内正常内分泌物质的合成、运输、释放、结合、代谢等过程,激活或抑制内分泌系统的功能,从而破坏机体的稳定性。环境雌激素及其危害已成为世界各国关注的焦点。时间分辨荧光因其灵敏度高、操作简便、不受样品的自然荧光干扰等优点,在方法学研究、临床应用和分析化学中得到了广泛应用。　　本课题研究的主要内容是建立时间分辨荧光免疫分析测定环境雌激素的新方法。利用生物素-链霉亲和素的信号放大作用,采用荧光物质标记在链霉亲和素上,以具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为示踪物,制备一种灵敏度高、稳定性好的新型荧光免疫分析试剂,进而建立生物素-链霉亲和素放大的时间分辨荧光免疫分析方法。　　该研究主要包括以下几方面:　　一、生物素-链霉亲和素放大时间分辨荧光免疫分析法测定己烯雌酚　　以己烯雌酚完全抗原包被微孔板,板上的完全抗原和样品中的己烯雌酚竞争结合己烯雌酚抗体,羊抗兔 IgG-生物素再与抗体结合,铕标记的链霉亲和素再与羊抗兔IgG-生物素结合,建立了生物素-链霉亲和素放大时间分辨荧光免疫分析测定己烯雌酚的新方法。在1.0pg/mL~1.0mg/mL之间呈良好的线性,其线性回归方程为ΔF=925.4lg(C)+15808.5,相关系数为0.9944,检出限为0.81pg/mL。所建立的方法用于血清中己烯雌酚含量的测定,结果满意。　　二、包被抗体模式时间分辨荧光免疫分析法测定双酚A　　采用双酚A抗体包被微孔板,羊抗兔IgG-生物素与样品中双酚A半抗原竞争结合板上的抗体,铕标记的链霉亲和素再与羊抗兔IgG-生物素结合,建立了固相抗体模式的生物素-链霉亲和素放大时间分辨荧光免疫分析测定双酚A的新方法。在1.0pg/mL~10.0mg/mL之间有良好的线性,其线性回归方程为ΔF=3231.3lg( C)+18959.8,相关系数为0.9948,方法的检测限为1.0pg/mL,检出限为0.50pg/mL。将此方法用于食品包装袋浸取液中双酚A的测定,结果满意。　　三、基于固相抗体模式时间分辨荧光免疫分析测定雌三醇　　基于固相抗体竞争反应模式,采用雌三醇抗体包被微孔板,铕标记的雌三醇完全抗原和样品中的雌三醇半抗原竞争结合板上的抗体,建立了包被抗体竞争免疫反应模式的时间分辨荧光免疫分析测定雌三醇的新方法,在优化的条件下,在5.0 pg/mL~1.0 mg/mL之间有良好的线性,其线性回归方程为ΔF=4601.1 lg(C)+1455.9,相关系数为0.9925,检出限为4.0 pg/mL。该方法用于检测血清中雌三醇的含量,结果令人满意。　　四、包被抗原模式时间分辨荧光免疫法测定双酚A　　采用正交实验优化免疫反应的条件,将时间分辨荧光免疫技术与正交实验结合起来,以双酚A完全抗原包被微孔板,板上的完全抗原和样品中的双酚A竞争结合双酚A抗体,羊抗兔IgG-生物素再与双酚A抗体结合,以铕标记的链霉亲和素作为标记物,建立了包被抗原竞争免疫反应模式的时间分辨荧光免疫分析测定双酚 A的新方法。此方法在0.10 pg/mL~100.0 ng/mL之间有良好的线性,其线性回归方程为ΔF=1906.8+330.2 lg(C),相关系数为0.9937,方法的检测限为0.10 pg/mL。将此方法用于食品包袋中双酚A的测定,结果满意。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

前言

第一章 绪论

1.1 环境雌激素概述

1.2 免疫分析技术

1.3 时间分辨荧光免疫分析技术

1.4 生物素-亲和素系统

1.5 本课题研究的主要内容及意义

第二章 生物素-链霉亲和素放大时间分辨荧光免疫分析法测定己烯雌酚

2.1 前言

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

2.4 小结

第三章 包被抗体模式时间分辨荧光免疫分析法测定双酚A

3.1 前言

3.2 实验部分

3.3 结果与讨论

3.4 小结

第四章 基于固相抗体模式时间分辨荧光免疫分析测定雌三醇

4.1 前言

4.2 实验部分

4.3 结果与讨论

4.4 小结

第五章 包被抗原模式时间分辨荧光免疫法测定双酚A

5.1 前言

5.2 实验部分

5.3 结果与讨论

5.4 小结

第六章 结论与展望

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表的学术论文