微波消融联合树突状细胞瘤内注射对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群影响的实验研究

摘要

目的: 1.探讨微波消融对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响； 2.观测不同功能阶段的树突状细胞瘤内注射联合微波消融治疗后荷瘤小鼠免疫功能变化的时间曲线，为DC二次瘤内注射寻找合适的时间窗，为临床抗肿瘤治疗提供实验依据。 方法: 1.无菌条件下取出4只健康BALB/C小鼠长骨骨髓，在两培养板中诱导培养成不同功能阶段的树突状细胞，光镜观察DCs形态变化，流式细胞仪鉴定DCs细胞膜表面标志物，并测定其MLR能力，留取DC待用。 2.BALB/C小鼠96只，雌雄各半，随机分为四组，每组24只，1-4组分别为对照组、单纯MA组、MA联合iDCs瘤内注射组及MA联合成熟DCs瘤内注射组。 3.小鼠背部皮下注射骨髓瘤细胞悬液，肿瘤直径约10mm时，对2-4组小鼠肿瘤行MA治疗，MA治疗后6小时分别对3、4组小鼠瘤体内多点注射体外培养的iDCs及成熟DCs。 4.分别于MA治疗后1、3、5、7、9及11天流式细胞仪检测各组小鼠外周T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8)，并计算CD4+/CD8+值。 5.采用SPSS11.0统计软件，以重复测量数据方差分析的方法进行统计学检验；α=0.05为检验水准。 结果: 1.DCs培养结果：骨髓来源的单核细胞经过小鼠重组GM-CSF和IL-4诱导分化，第3天可见小丘样突起，以后突起逐渐增多，第7～9天时，形态较大且刺突显著，呈花簇状生长；第10天流式细胞仪检测显示：A培养板中DCs细胞表达CD11c、CD83、CD86分别为70.25％、32.29％、33.33％，为未成熟DC表型；加入终浓度为1μg/ml LPS的B培养板中DCs细胞表达CD11c、CD83、CD86分别为72.81％、54.24％、73.48％，CD83、CD86的表达显著高于A组DCs(P<0.05)，提示B培养板中细胞为成熟DCs。A、B培养板中DCs均能体外激发MLR(P<0.05)，并随DCs浓度增加而呈现增长趋势(P<0.05)，其中成熟Ocs刺激增殖的强度显著大于iDCs组(P<0.05)。 2.小鼠外周血T淋巴细胞亚群流式细胞仪检测：荷瘤对照组小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+随着生存时间的延长而逐渐下降(P<0.05)；MA组小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+随生存时间的延长无明显改变，均值高于荷瘤对照组，但无统计学意义(P>0.05)；在术后3、5、7天，MA联合iDCs组小鼠的CD4+及CD4+/CD8+较单纯MA组及MA联合成熟DCs组减低(P<0.05)；而MA.联合成熟DCs组小鼠CD3+、CD4+及CD4+/CD8+则在术后第3、5、7天较单纯MA组高(P<0.05)。 结论: 1.MA能改善荷瘤小鼠的免疫抑制状态。 2.MA联合成熟DCs能进一步增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫反应 3.MA联合未成熟的DCs可能诱导荷瘤小鼠的免疫耐受。 4.MA联合成熟DCs瘤内注射增强荷瘤小鼠免疫功能的时间约1周，为二次瘤内注射成熟DCs提供实验基础，对DCs应用于临床治疗肿瘤提供理论依据。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前言

材料和方法

1.实验材料

2.实验方法

3.统计学方法

结果

讨论

结论

创新之处

论文图片

参考文献

综述 热消融联合DC注射治疗原发性肝癌

攻读硕士学位期间撰写学术论文题目

致谢