梭子蟹下脚料酶法制备活性肽的研究

摘要

梭子蟹下脚料是梭子蟹蟹肉加工的废弃物，包括蟹脚、背壳和内脏等，其中蛋白质含量占30％～40％。从梭子蟹下脚料中提取抗氧化肽及抗菌肽，使其中的蛋白几乎全部利用，不仅提升梭子蟹的附加值，还能减少废弃物造成的环境污染，具有良好的经济和社会效益。
　　 本课题以梭子蟹下脚料为原料，对梭子蟹下脚料酶法提取两种活性肽—抗氧化肽与抗菌肽的工艺进行研究。包含以下三个方面：制备蟹抗氧化肽最佳工艺条件的研究；葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蟹抗氧化肽及其理化特性的研究;制备蟹抗菌肽的最佳工艺条件的研究。实验结果如下：
　　 (1)制备蟹抗氧化肽最佳工艺条件研究结果表明：中性蛋白酶制备蟹抗氧化肽为最适蛋白酶；通过单因素与正交试验确定酶解最佳工艺条件为，料液比1∶6，水浴预处理时间1.5h，酶解温度50℃，酶解pH值7.5，加酶量3000u/g，水解时间4h。此条件下水解液的多肽含量为65.66％。蟹抗氧化肽粗品得率为43.3％。
　　 (2)葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蟹抗氧化肽及其理化特性的研究结果表明：经过葡聚糖凝胶G-50与G-25两步分离纯化得到的3个组分中组分3抗氧化性较强，经HPLC分析组分3已基本达到纯化；分子量在1096.5左右；组分3由11种氨基酸组成，其中具有抗氧化能力的酪氨酸、半胱氨酸和组氨酸所占比例很高。组分3具有很好的溶解性及溶解稳定性，吸油性强，在食品加工中可以得到很好的应用。蟹抗氧化肽得率为13.3％。
　　 (3)制备蟹抗菌肽的最佳工艺条件的研究结果表明：风味蛋白酶为制备蟹抗菌肽的最适蛋白酶；通过单因素与响应面试验确定酶解最佳工艺条件为，料液比l∶5.9，水浴预处理时间1.5h，酶解温度45℃，酶解pH值6，加酶量3616.2u/g，水解时间4.5h。此条件下水解液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大为19.0mm，水解液的多肽含量为58.46％。蟹抗菌肽粗品得率为38.3％。

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致谢

第一章绪论

1.1梭子蟹的概况

1.1.1梭子蟹形态及营养价值

1.1.2梭子蟹的研究开发现状

1.2活性肽的开发

1.2.1活性肽简介

1.2.2活性肽的性质及分类

1.2.3活性肽的生产方法

1.3抗氧化肽的概况

1.3.1抗氧化肽的抗氧化机理

1.3.2抗氧化肽的分离纯化方法

1.3.3抗氧化肽的国内外研究现状

1.4抗菌肽的概况

1.4.1抗菌肽的生产

1.4.2抗菌肽的理化特征及生物学活性

1.4.3抗菌肽的作用机制

1.5立题依据与研究内容

1.5.1立题依据

1.5.2研究内容

第二章酶解制备蟹抗氧化肽的工艺研究

2.1材料与仪器

2.1.1材料与试剂

2.1.2仪器与设备

2.2实验方法

2.2.1工艺流程

2.2.2蟹下脚料的前处理

2.2.3水解蛋白酶的筛选

2.2.4酶解制备蟹抗氧化肽粗品的最佳工艺的优化

2.2.5相关参数的测定与计算

2.3结果与讨论

2.3.1脱脂蟹下脚料基本成分的测定

2.3.2酶活力的测定结果

2.3.3蛋白酶的筛选

2.3.4酶解制备蟹抗氧化肽粗品的工艺优化

2.3.5蟹抗氧化肽粗品的得率

2.4本章小结

第三章蟹抗氧化肽的分离纯化及理化性质测定

3.1材料与仪器

3.1.1材料与试剂

3.1.2仪器与设备

3.2实验方法

3.2.1蟹抗氧化肽粗品的分离纯化方法

3.2.2蟹抗氧化肽抗氧化特性的评判

3.2.3蟹抗氧化肽的纯度鉴定

3.2.4蟹抗氧化肽的理化性质测定

3.2.5蟹抗氧化肽的得率计算

3.3结果与分析

3.3.1蟹抗氧化肽粗品的分离纯化结果

3.3.2蟹抗氧化肽的抗氧化特性评判结果

3.3.3蟹抗氧化肽纯度鉴定

3.3.4蟹抗氧化肽的理化性质

3.3.5蟹抗氧化肽的得率

3.4本章小结

第四章酶解制备蟹抗菌肽的工艺研究

4.1材料与仪器

4.1.1材料与试剂

4.1.2仪器与设备

4.2实验方法

4.2.1工艺流程

4.2.2蟹下脚料的前处理

4.2.3酶解制备蟹抗菌肽的工艺优化

4.2.4相关参数的测定与计算

4.3结果与讨论

4.3.1单因素试验结果

4.3.2响应面试验确定蟹抗菌肽制备的最佳工艺参数

4.3.3蟹抗菌肽粗品的得率

4.4本章小结

第五章结论与展望

5.1结论

5.2展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文