羊种布氏菌L7/L12基因重组BCG的构建及其对小鼠免疫效果的实验研究

摘要

目的：观察羊种布氏菌重组质粒pMV361-L7/L12电转入BCG中的表达情况并评价其免疫效应.　　方法：将重组质粒pMV361-L7/L12电转至BCG(Bacillus Calmette-Guerin),筛选阳性克隆,挑选其中一菌落至Dubos液体培养基中培养生长,直至其A600为0.6左右时45℃诱导表达,然后用诱导表达后的培养物免疫小鼠.选用60只BALB/c小鼠进行免疫效果分析,将其分成3组,分别为rBCG-L7/L12组、BCG组及PBST组.MTT法检测小鼠脾脏淋巴细胞的特异性增殖效应,ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清中细胞因子含量和血清中特异性抗体含量,流式细胞术检测脾脏淋巴细胞凋亡情况及外周血T细胞亚群分布情况,HE染色观察小鼠脾脏组织学变化情况.　　结果：Western blotting检测结果表明L7/L12基因在rBCG-L7/L12中能够有效诱导表达.MTT法显示rBCG-L7/L12组的小鼠脾脏淋巴细胞特异性增殖效应与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).ELISA法检测到rBCG-L7/L12组小鼠脾淋巴细胞上清液中TNF-α、IL-1b、IL-12和IL-2等细胞因子含量升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),而IL-4和IL-10含量无明显变化,与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);ELISA法检测到rBCG-L7/L12组小鼠血清中L7/L12抗体含量明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).细胞凋亡结果显示重组蛋白主要抑制了脾细胞的早期凋亡.外周血T淋巴细胞亚群分析,与对照组相比,实验组CD4+T淋巴细胞百分比及CD4+T/CD8+T升高,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色观察小鼠脾脏组织学变化可见实验组较对照组脾脏生发中心面积增大.　　结论：羊种布氏菌L7/L12基因重组BCG可以有效地诱导小鼠产生特异性免疫应答,可作为预防布鲁杆菌病的疫苗候选株之一.

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