壮药狗蚁草调控PI3K/Akt/P70s6K信号通路抗肝纤维化作用的机制研究

摘要

目的：研究壮药狗蚁草抗肝纤维化作用与PI3K/Akt/P70s6K信号通路的关系。　　方法：制备狗蚁草乙酸乙酯部位浸膏，灌胃大鼠取含药血清，通过MTT法检测狗蚁草乙酸乙酯部位大鼠含药血清对肝星状细胞（Hepatic Stellate T6 Cells，HSC-T6）细胞增值的作用。　　将小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组（0.2mg·kg-1）、狗蚁草乙酸乙酯部位高剂量组（相当于生药量40g·kg-1）、中剂量组（相当于生药量20g·kg-1）、低剂量组（相当于生药量10g·kg-1）。除正常组对照除外，其余每组给予25％CCL4花生油溶液背部皮下注射，1次/3d，连续10W。造模同时，各组给与相应药物和蒸馏水灌胃，1次/d，10W后取血及肝组织。分别检测各组小鼠血清中ALT、AST含量，ELISA法测小鼠肝组织中I型胶原蛋白（Collagen Type I，Col I）、III型胶原蛋白（Collagen Type III，Col III）的含量，HE和MASSON染色观察小鼠肝组织肝纤维化程度，并进行评分。采用RT-PCR法检测狗蚁草乙酸乙酯部位对肝纤维化小鼠肝脏组织PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PDGF-B、PTEN、PI3K、Akt、P70s6K、α-SMA转录的影响，采用免疫组化法检测狗蚁草乙酸乙酯部位对肝纤维化小鼠肝脏组织PI3K/Akt/P70s6K通路相关蛋白 PDGF-BB、PTEN、PI3K、Akt、P70s6K、α-SMA表达的影响。　　结果：狗蚁草乙酸乙酯部位10%、5%、2.5%的含药血清对HSC-T6细胞的增殖有显著抑制作用。狗蚁草乙酸乙酯部位高、中、低剂量组均能够降低肝纤维化小鼠血清中ALT、AST的含量，降低CCL4所致肝纤维化小鼠的死亡率。狗蚁草乙酸乙酯部位高、中剂量组均能降低肝组织中Col I、Col III的含量，减轻炎症细胞浸润，降低肝脏胶原蛋白的生成，降低Ishak评分，改善病理损伤程度。狗蚁草乙酸乙酯部位低剂量组肝纤维化病变程度与模型组比较接近，但能降低肝组织中Col I的含量。　　狗蚁草乙酸乙酯部位高、中剂量组均能下调PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PDGF-B、PI3K、P70s6K、α-SMA转录水平，上调PTEN基因转录水平；下调相关蛋白PDGF-BB、PI3K、P70s6K、α-SMA表达，上调PTEN蛋白表达。狗蚁草乙酸乙酯部位低剂量组能下调PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PI3K转录，下调PDGF-BB蛋白的表达，上调PTEN蛋白表达。　　结论：狗蚁草乙酸乙酯部位能够抑制HSC-T6细胞的增殖，降低CCL4所致肝纤维化小鼠血清中ALT、AST含量和肝脏中Col I、Col III的含量，改善肝纤维化小鼠病理损伤程度，其抗肝纤维化的机制可能是通过下调PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PDGF-B、PI3K、P70s6K、α-SMA转录和上调PTEN基因转录，下调相关蛋白PDGF-BB、PI3K、P70s6K、α-SMA表达和上调PTEN蛋白的表达，从而发挥抗纤维化作用。