H2S介导的S-硫巯基修饰调节SnRK2.6活性促进ABA诱导的气孔闭合

目录

声明

第一章 文献综述

1.1.1 植物体内脱落酸信号转导途径

1.1.2 脱落酸生物学功能

1.2.1 SnRK2.6的生理功能

1.2.2 SnRK2.6激酶活性的调控方式

1.3.1 气体分子硫化氢的理化性质

1.3.2 气体分子硫化氢的合成与代谢

1.3.3 气体分子硫化氢介导的S-硫巯基调控模式

1.3.4 气体分子硫化氢的生物学功能

1.4 本研究的目的与意义

第二章 H2S对SnRK2.6蛋白S-硫巯基化修饰的影响及位点鉴定

2.1.1 菌株

2.1.2 试剂与仪器

2.2 实验方法

2.2.1 原核蛋白诱导及纯化

2.2.2 质谱检测SnRK2.6蛋白S-硫巯基化修饰位点

2.2.3 模型建立

2.2.4 生物素转化法检测SnRK2.6蛋白S-硫巯基化修饰

2.2.5 生物素转化法检测内源拟南芥的SnRK2.6蛋白S-硫巯基化修饰

2.2.6 拟南芥总蛋白提取和内源硫巯基位点检测

2.3 结果与分析

2.3.1 SnRK2.6及点突变蛋白的表达与纯化结果

2.3.2 SnRK2.6蛋白存在S-硫巯基化位点

2.3.3 H2S对SnRK2.6蛋白S-硫巯基化修饰的影响

2.3.4 H2S介导的SnRK2.6蛋白上S-硫巯基化专一性的确定

2.3.5 拟南芥中SnRK2.6存在S-硫巯基化修饰

2.4 本章小结

第三章 SnRK2.6的S-硫巯基化修饰影响蛋白生化功能分析

3.1 实验材料

3.1.1 菌株和载体

3.1.2 试剂与仪器

3.2 实验方法

3.2.1 点突变、底物的载体构建及蛋白纯化

3.2.2 试剂盒检测激酶活性

3.2.3 磷酸化抗体检测激酶活性

3.2.4 Pull-down检测蛋白互作

3.2.5 BiFc检测蛋白互作

3.3 结果与分析

3.3.1 H2S促进SnRK2.6蛋白酶活

3.3.2 H2S增强SnRK2.6和ABF2体外互作

3.3.3 H2S增强SnRK2.6和ABF2体内互作

3.4 本章小结

第四章 S-硫巯基化修饰对SnRK2.6蛋白生理功能的影响

4.1.1 植株

4.2 实验方法

4.2.1 ost1-3的S-硫巯基化修饰位点点突变遗传株系的构建及鉴定

4.2.2 共聚焦显微镜观察ost1-3和点突变遗传株系亚细胞定位的变化

4.2.3 ost1-3和点突变遗传株系叶片失水

4.2.4 ost1-3和点突变遗传株系气体交换测

4.2.5 植株干旱实验

4.2.6 ABA处理下保卫细胞中H2S含量的检测

4.2.7 气孔导度的测量

4.2.8 离子渗透率率和丙二醛（MDA）的测量

4.3 结果与分析

4.3.1 S-硫巯基化修饰不影响SnRK2.6亚细胞定位和表达

4.3.2 ABA提高保卫细胞中硫化氢的含量

4.3.3 硫巯基点突变影响气孔闭合

4.3.4 硫巯基点突变遗传株系的叶片失水增加

4.3.5 硫巯基点突变遗传株系的干旱耐受性降低

4.4 本章小结

第五章 H2S对保卫细胞钙离子信号转导的影响

5.1 实验材料

5.1.1 试剂和仪器

5.2 实验方法

5.2.1 Fluo-3AM对保卫细胞胞质钙离子含量的检测

5.2.2 离子流检测钙离子

5.3 实验结果

5.3.1 H2S和ABA提高保卫细胞胞质钙含量

5.3.2 H2S和ABA影响保卫细胞中钙离子跨膜流动

5.4 本章小结

第六章 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

参考文献

附录

致谢

个人简历