HSP60和IFI16抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制机制的研究

目录

声明

主要符号对照表

第一章 文献综述

1.1 PRRS 概述

1.1.1 PRRSV生物学特征

1.1.2 PRRSV与宿主免疫应答

1.1.3 PRRSV的防控

1.2 抗病毒先天免疫应答

1.2.1 TLR信号通路

1.2.2 RLR信号通路

1.2.3 干扰素信号通路

1.2.4 ISGs抗病毒功能

1.3 miRNAs 概述

1.4 HSP60概述

1.4.1 HSP60理化特性

1.4.2 HSP60分布及功能

1.4.3 HSP60免疫调节功能

1.4.4 HSP60与细胞凋亡

1.4.5 HSP60调控病毒复制

1.5 IFI16概述

1.5.1 IFI16的免疫调节功能

1.5.2 IFI16与病毒复制

第二章 基于miR-382-5p 抗PRRSV基因的筛选

2.1 材料

2.1.1 细胞与病毒

2.1.2 抗体和试剂

2.1.3 试剂配制

2.1.4 仪器设备

2.2.1 病毒繁殖与滴度测定

2.2.2 miRNA提取、反转录及qPCR

2.2.3 RNA干扰试验

2.2.4 质粒构建

2.2.5 质粒提取

2.2.6 真核表达质粒的转染

2.2.7 细胞RNA提取、反转录及qPCR

2.2.8 双荧光素酶报告基因检测

2.2.9 免疫印迹试验（Western Blot）

2.2.10 统计学分析

2.3 结果

2.3.1 PRRSV感染MARC-145细胞后上调miR-382-5p的表达

2.3.2 miR-382-5p促进PRRSV复制

2.3.3 miR-382-5p负向调控Ⅰ-IFN的转录

2.3.4 抗病毒基因的筛选

2.3.5 抗病毒靶基因的鉴定

2.4 讨论

第三章 HSP60 抑制PRRSV 复制机制的研究

3.1 材料

3.1.1 细胞与病毒

3.1.2 抗体和试剂

3.1.3 试剂配制

3.1.4 仪器设备

3.2 方法

3.2.1 质粒构建

3.2.2 siRNA干扰

3.2.3 RT-qPCR

3.2.4 双荧光素酶报告基因检测

3.2.5 HSP60与MAVS免疫共沉淀

3.2.6 HSP60与MAVS激光共聚焦

3.2.7 统计学分析

3.3.1 沉默HSP60促进PRRSV在MARC-145细胞中的复制

3.3.2 沉默HSP60促进PRRSV在PAM细胞中的复制

3.3.3 过表达HSP60抑制PRRSV复制

3.3.4 HSP60正向调控polyI:C诱导的Ⅰ-IFN的转录

3.3.5 HSP60促进MAVS诱导的Ⅰ-IFN应答

3.3.6 HSP60促进Ⅰ-IFN应答具有MAVS依赖性

3.3.7 HSP60与MAVS相互作用

3.3.8 HSP60抑制PRRSV复制需要MAVS的参与

3.4 讨论

第四章 IFI16 抑制PRRSV 复制机制的研究

4.1 材料

4.1.1 细胞与病毒

4.1.2 抗体和试剂

4.1.3 试剂配制

4.2 方法

4.2.1 质粒构建

4.2.2 siRNA干扰

4.2.3 双荧光素酶报告基因检测

4.2.4 IFI16与MAVS免疫共沉淀

4.2.5 统计学分析

4.3结果

4.3.1 过表达IFI16抑制PRRSV的复制

4.3.2 沉默IFI16促进PRRSV的复制

4.3.3 IFN-β诱导IFI16的表达

4.3.4 PRRSV感染上调IFI16的表达

4.3.5 IFI16促进PRRSV诱导的IFN-β的转录

4.3.6 IFI16促进polyI:C诱导的Ⅰ-IFN转录

4.3.7 IFI16促进MAVS诱导的Ⅰ-IFN应答

4.3.8 IFI16促进Ⅰ-IFN应答具有MAVS依赖性

4.3.9 IFI16与MAVS相互作用

4.4 讨论

全文结论

本研究创新点

参考文献

致谢

个人简历