靶向Nsp9基因的特异性小干扰RNA(siRNA)抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的研究

摘要

为筛选有效抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的小干扰RNA(siRNA),本试验设计并合成了4对靶向PRRSV Nsp9基因的siRNA及1对作为对照的无效siRNA,将其克隆入pSilencer4.1-CMV neo载体,分别命名为pSi-294、pSi-367、pSi-409、pSi-1488、pSi-Ctr。5个重组质粒转染Marc-145细胞24h后进行PRRSV攻毒试验,然后进行IFA、采用Real-time PCR、TCID50测定和Western blotting对siRNA的抑制效果进行分析评价。IFA和West-ern blotting试验结果显示,pSi-294和pSi-1488能有效抑制PRRSV Nsp9和M蛋白的表达;Real-time PCR结果显示,与阴性对照相比,Nsp9基因的表达水平下降。结果表明,siRNA可用于PRRSV的基础研究中。