猪精原干细胞永生化细胞系的建立

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第一章 精原干细胞与细胞永生化概述

1.1精子发生简介

1.2.1 精原干细胞简介

1.2.2 精原干细胞的微环境

1.2.3 精原干细胞的分子标记

1.2.4 精原干细胞的分离、纯化与富集

1.2.5 精原干细胞的体外培养

1.2.6 精原干细胞移植

1.2.7 精原干细胞的应用及存在问题

1.3.1 永生化细胞

1.3.2 细胞永生化的方法

1.3.3 永生化的分子机制

1.3.4 永生化的功能和应用

1.4 研究目的及意义

第二章 猪精原干细胞的分离纯化和永生化

2.1.1 材料

2.1.2 主要试剂

2.2试验步骤

2.2.1 猪精原干细胞的获得

2.2.2 永生化慢病毒包装及病毒转导

2.2.3 流式分选获得高纯度的精原干细胞

2.3结果与分析

2.3.1 猪精原细胞的分离富集纯化

2.3.2 永生化慢病毒转导猪精原细胞

2.3.3 流式分选后细胞纯度鉴定

2.4讨论与小结

第三章 永生化猪精原干细胞的培养

3.1.1 细胞系

3.1.2 主要试剂

3.2 试验步骤

3.2.1 细胞倍增时间检测

3.2.2 细胞骨架形态检测

3.2.3 RA诱导 Ttag和 Puro 细胞系分化检测

3.3结果与分析

3.3.1 永生化猪精原干细胞在培养过程中的形态变化

3.3.2 永生化猪精原干细胞的倍增时间

3.3.3 永生化猪精原干细胞的形态结构

3.3.4 维甲酸诱导对永生化猪精原干细胞的影响

3.4讨论与小结

第四章 永生化猪精原干细胞的鉴定

4.1材料和试剂

4.1.1 细胞系

4.1.2 主要试剂

4.2 试验步骤

4.2.1 细胞 marker鉴定

4.2.2 永生化猪精原干细胞异体移植鉴定

4.2.3 永生化猪精原干细胞核型鉴定

4.2.4 永生化猪精原干细胞 DNA content 检测

4.3结果与分析

4.3.1 RT-PCR检测不同代数永生化细胞标志物表达

4.3.2 Western Blotting 检测不同代数永生化细胞标志物表达

4.3.3 细胞免疫荧光检测永生化细胞标志物表达

4.3.4永生化猪精原干细胞在受体小鼠睾丸定植检测

4.3.5永生化猪精原干细胞核型鉴定

4.4 讨论与小结

结论

附录

参考文献

致谢

个人简历