盐析和双水相萃取法在纯化藻蓝蛋白过程中的研究

摘要

本论文以新鲜巢湖水华蓝藻为研究对象，通过冻融破壁方法提取藻蓝蛋白粗提液，以藻蓝蛋白的纯度和得率为指标，在此基础上，研究了不同盐析剂对藻蓝蛋白提纯效果的影响和双水相法提纯藻蓝蛋白的条件。另外，探索了盐析法和双水相萃取法的结合方式。
　　主要实验结果摘要如下:
　　1.不同盐析剂对藻蓝蛋白提纯效果的影响研究。通过冻融破壁法获得一定量藻蓝蛋白粗提液。选取硫酸铵、柠檬酸三铵、柠檬酸钾三种盐析剂进行两步盐析实验，结合光谱扫描法选取三种盐析剂的最优投加量，最终优选出最佳的盐析剂。结果表明:硫酸铵是最佳的藻蓝蛋白盐析剂。硫酸铵盐析剂两步盐析的最佳投加量分别为1.2mol/L和2.0mol/L，藻蓝蛋白纯度可达到1.95.
　　2.PEG-硫酸铵体系对藻蓝蛋白提纯效果的影响。以藻蓝蛋白纯度和回收率为指标，经过冻融和盐析所得的藻蓝蛋白液，再用正交法选取双水相体系中聚乙二醇的分子量和其他实验条件，之后用单因素法进一步确认不同条件对藻蓝蛋白提取效果的影响。结果表明:选用聚乙二醇1000和硫酸铵构成双水相体系。聚乙二醇质量浓度为9％，硫酸铵质量浓度为26％、使用未调节pH的原水样、NaCl质量浓度0。
　　3.盐析法和双水相法结合方式的探索。考察了先双水相后盐析和先盐析后双水相的结合方法。结果表明，由于聚乙二醇在藻蓝蛋白液中较难去除，所以双水相萃取实验后再接盐析比较难以实现，且粗提液接双水相纯度提高没有盐析效果好，所以盐析和双水相实验相结合的方式应为盐析后接双水相。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 研究背景

1．1．1 巢湖及其地理位置

1．1．2 巢湖流域概况

1．1．3 历史上的巢湖

1．1．4 巢湖水体富营养化现状

1．2 研究意义

1．2．1 巢湖富营养化危害

1．2．2 巢湖蓝藻常见的处理办法

1．2．3 水华蓝藻资源化利用现状

1．3 研究概述

1．3．1 基本概念

1．3．2 藻蓝蛋白提取纯化国内外研究现状

1．3．3 藻蓝蛋白提取纯化

1．3．4 现存的主要问题和不足

1．4 课题的提出

1．4．1 选题依据

1．4．2 研究内容

第二章 不同盐析剂对藻蓝蛋白提纯效果的影响

2．1 前言

2．2 实验部分

2．2．1 验材料与仪器

2．2．2 实验步骤

2．3 分析方法

2．4 实验结果与讨论

2．4．1 硫酸铵盐析单因素实验结果

2．4．2 柠檬酸三铵盐析单因素实验结果

2．4．3 柠檬酸钾盐析单因素实验结果

2．5 本章小结

第三章 PEG-硫酸铵体系对藻蓝蛋白提纯效果的影响

3．1 前言

3．2 实验部分

3．2．1 实验材料与器材

3．2．2 实验步骤

3．3 分析方法

3．3．1 藻蓝蛋白纯度的计算

3．3．2 藻蓝蛋白回收率计算

3．4 实验结果与讨论

3．4．1 双水相萃取正交实验

3．4．1 双水相萃取单因素实验结果

3．5 本章小结

第四章 盐析结合双水相萃取制备藻蓝蛋白

4．1 前言

4．2 实验部分

4．2．1 实验材料与器材

4．2．2 实验步骤

4．3 分析方法

4．3．1 藻蓝蛋白纯度的计算

4．4 实验结果与讨论

4．4．1 藻蓝蛋白粗提液双水相萃取单因素实验结果

4．4．2 双水相萃取结合盐析实验结果

4．4．3 二步盐析结合双水相萃取单因素实验结果

4．5 本章小结

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．1．1 不同盐析剂盐析对藻蓝蛋白提纯的影响

5．1．2 PEG-硫酸铵体系对藻蓝蛋白提纯效果的影响

5．1．3 盐析结合双水相萃取提纯藻蓝蛋白的研究

5．2 展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文