先天性甲状腺功能减低症患者SLC5A5基因突变筛查和体外功能研究

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缩略语对照表

第一章 绪论

1.1 先天性甲状腺功能减低症概述

1.2 SLC5A5 基因与 CH

1.2.1 SLC5A5 基因结构与功能

1.2.2 SLC5A5 基因突变与 CH研究进展

1.2.3 SLC5A5 基因突变功能研究进展

1.3 立题背景与意义

第二章 先天性甲状腺功能低下症SLC5A5 基因突变筛查

2.1 实验材料

2.1.1 研究对象

2.1.2 实验试剂

2.1.3 实验仪器

2.2 基因组 DNA的提取

2.3 高通量测序

2.3.1 高通量测序引物设计

2.3.2 文库构建

2.3.3 模板的制备

2.3.4 富集阳性模板

2.3.5 PGM 测序

2.4 疑似致病位点的筛选和验证

2.4.1 疑似致病位点的筛选

2.4.2 变异位点的一代测序验证

2.5 生物信息学分析

2.5.1 疑似致病位点的蛋白质功能预测

2.5.2 疑似致病位点的序列保守性分析

2.5.3 蛋白结构域分析

2.5.4 变异位点致病性等级划分

2.6 实验结果和分析

2.6.1 患者临床信息

2.6.2 SLC5A5 基因突变筛查结果

2.6.3 计算机软件预测突变对蛋白功能的影响

2.6.4 SLC5A5 突变致病等级划分

2.7 结论

第三章 SLC5A5 基因突变的体外生物学功能研究

3.1实验材料

3.1.1 实验试剂

3.1.2 实验主要仪器

3.1.3 实验相关溶液配制

3.2 载体构建

3.2.1 构建 SLC5A5 野生型真核表达载体

3.2.2 构建 SLC5A5 突变型真核表达载体

3.3 SLC5A5 重组质粒转染

3.4 反转录实时荧光定量 PCR检测 SLC5A5 mRNA表达

3.5 Western Blotting检测蛋白表达

3.6 流式细胞术检测蛋白表达

3.7 NIS同源建模

3.8 实验结果

3.8.1 SLC5A5 重组质粒构建结果

3.8.2 SLC5A5 重组质粒在 HEK-293T细胞中的转染效率

3.8.3 实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）检测 SLC5A5 mRNA表达结果

3.8.4 蛋白免疫印迹法（WB）检测 NIS 蛋白表达结果

3.8.5 流式细胞术检测 NIS 蛋白表达结果

3.8.6 NIS 同源建模结果

3.9 结论

第四章 讨论

参考文献

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢