声明
第1章 综述
1.1 引言
1.2 贝类防御机制概述
1.2.1贝类免疫的模式识别机制
1.2.2 病原相关分子模式（PAMP）
1.2.3 模式识别受体（PRR）
1.3 Toll-样受体的研究进展
1.3.1 TLRs的发现
1.3.2 TLRs的分子结构
1.3.3 TLRs的细胞定位
1.4 TLRs的模式识别作用
1.4.1对细菌的识别
1.4.2对病毒核酸的识别
1.4.3对真菌多糖成分的识别
1.4.4对原生动物和寄生虫的识别
1.4.5识别损伤相关或危险相关模式分子
1.5 TLR介导的天然免疫信号通路
1.6水生动物TLR研究进展
1.7 本研究目的及意义
第2章 三角帆蚌Toll-样受体的鉴定及其免疫功能
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 实验动物
2.2.2 实验菌株、载体及细胞
2.2.3 实验试剂
2.2.4 实验仪器
2.2.5实验用引物信息
2.3 实验方法
2.3.1三角帆蚌总RNA的提取
2.3.2三角帆蚌cDNA的合成
2.3.3 HcTLRs基因中间序列
2.3.4 HcTLRs cDNA序列全长
2.3.5 HcTLRs基因序列分析
2.3.6 HcTLRs在蚌组织中的特异性表达
2.3.7蚌的刺激试验
2.3.8 荧光实时定量PCR
2.3.9 HcTLRs的原核表达及重组蛋白纯化
2.3.10 HcToll9多克隆抗体的制备及纯化
2.3.11 HcToll9多克隆抗体的检测
2.3.12 检测HcToll9在各组织中的表达
2.3.13微生物结合实验
2.3.14酶联免疫吸附试验
2.3.15 血细胞mRNA原位杂交
2.3.17亚细胞定位
2.3.18荧光素酶双报告基因试验
2.4 实验结果
2.4.1提取总RNA
2.4.2 HcToll8,9,10基因的全长克隆
2.4.3 TLRs基因cDNA全长及推导的氨基酸序列
2.4.4 氨基酸序列的同源性比对
2.4.5 系统进化树分析
2.4.6 HcTLRs基因的组织表达
2.4.7 PAMP刺激三角帆蚌后TLRs的表达模式
2.4.8 HcToll9和HcToll10原核表达和纯化
2.4.9 多克隆抗体及ELISA检测
2.4.10 HcToll9蛋白在蚌组织中的分布
2.4.11 rHcToll-9,10-LRR与微生物的结合
2.4.12 rHcToll-9,10-LRR与PAMPs的结合
2.4.13血细胞mRNA原位杂交
2.4.14 HcToll9,10重组蛋白亚细胞定位
2.4.15荧光素酶双报告基因实验
2.5讨论
第3章 结论与展望
3.1 结论
3.2展望
致谢
参考文献
南昌大学;
