一种新的粒毛盘菌胞内黑色素结构、精氨酸修饰及生物活性研究

摘要

本研究采用粒毛盘菌YM156，经过深层发酵得菌丝体，从菌丝体中提取黑色素并纯化获得胞内黑色素(LIM)。利用元素分析;紫外-可见吸收光谱;红外光谱(IR);质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)分析了LIM可能的化学结构式。
　　MTT细胞毒性实验表明LIM无毒性。采用精氨酸对LIM进行修饰，制备了精氨酸-黑色素衍生物(ALIM)。研究了LIM和ALIM对辐射引起的小鼠皮肤损伤的作用。结果表明，与模型组相比，LIM和ALIM处理组小鼠皮肤中抗氧化酶活性显著升高，丙二醛(MDA)含量降低;同时，白细胞介素-1α(Interleukin-1α，IL-1α)，白细胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)，白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)和肿瘤坏死因子（Tumour Necrosis Factor-α，TNF-α）水平降低。相同剂量下，ALIM对UVB损伤小鼠的保护作用明显高于LIM。我们认为，LIM和ALIM可用作紫外辐射损伤的保护剂。
　　建立慢性肾衰(chronic renal failure，CRF)小鼠模型，初步研究LIM、海昆肾喜胶囊(HC)、LIM+HC联合处理对CRF小鼠的保护作用。结果表明，LIM和HC单独处理、LIM+HC联合处理均可增加CRF小鼠肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)，谷胱甘肽(GSH)，谷胱甘肽还原酶(GSH-PX)的活性，降低MDA的含量;同时，降低了肾组织匀浆中IL-6，TNF-α和IL-1β以及诱导型一氧化氮合酶(Inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS)的水平。LIM+HC联合处理组对CRF小鼠的保护作用更强。这就意味着，LIM可应用于CRF的药物研究中。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 黑色素的研究概况

1．1．1 黑色素的来源

1．1．2 黑色素分类

1．1．3 黑色素的合成途径

1．1．4 黑色素结构解析

1．1．5 黑色素的生物活性及应用

1．1．6 黑色素的改性研究

1．2 粒毛盘菌黑色素研究状况

1．3 本课题研究的内容及意义

第二章 粒毛盘菌YM156胞内黑色素结构解析

2．1 引言

2．2 材料与仪器

2．2．1 菌株及材料

2．2．2 实验试剂

2．2．3 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 粒毛盘菌YM156胞内黑色素LIM的制备

2．3．2 元素分析

2．3．3 紫外-可见光谱、红外光谱

2．3．4 核磁分析

2．3．5 质谱分析

2．4 结果与分析

2．4．1 LIM元素分析

2．4．2 LIM紫外-可见吸收光谱

2．4．3 LIM红外光谱

2．4．4 LIM核磁共振分析

2．4．5 LIM质谱分析

2．5 讨论

2．6 本章小结

第三章 LIM的精氨酸修饰及其抗紫外辐射损伤活性

3．1 引言

3．2 材料

3．2．1 粒毛盘菌黑色素

3．2．2 试剂及药品

3．2．3 仪器及设备

3．3 实验方法

3．3．1 LIM的细胞毒性实验

3．3．2 LIM的精氨酸修饰

3．3．3 ALIM的溶解度测定

3．3．4 ALIM的结构验证

3．3．5 最小红斑剂量(MED)测定

3．3．6 动物分组及处理

3．3．7 氧化酶活和炎性因子检测

3．3．8 统计分析

3．4 结果与分析

3．4．1 LIM对HepG2细胞活力的影响

3．4．2 ALIM的溶解度

3．4．3 黑色素-精氨酸的结构验证

3．4．4 最小红斑剂量(MED)

3．4．5 LIM和ALIM对小鼠体重增长率和器官指数的影响

3．4．6 LIM和ALIM对小鼠皮肤氧化应激的影响

3．4．7 LIM和ALIM对小鼠皮肤炎性应激的影响

3．5 讨论

3．6 本章小结

第四章 LIM对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭小鼠的保护作用

4．1 引言

4．2 材料

4．2．1 粒毛盘菌黑色素

4．2．2 试剂及药品

4．2．3 仪器及设备

4．3 买验方法

4．3．1 动物及分组

4．3．2 血液指标测定

4．3．3 体重增长率和肾脏指数测定

4．3．4 肾脏组织匀浆的抗氧化指标的测定

4．3．5 肾组织匀浆的细胞因子的测定

4．3．6 统计分析

4．4 结果与分析

4．4．1 LIM对小鼠的状态和运动的影响

4．4．2 LIM对血清血肌酐、尿素氮、总蛋白和白蛋白水平的影响

4．4．3 LIM对小鼠体重的增长率和肾脏指数的影响

4．4．4 LIM对慢性肾衰小鼠肾组织匀浆氧化指标的影响

4．4．5 LIM对慢性肾衰小鼠肾组织匀浆炎性因子水平的影响

4．4．6 LIM对慢性肾衰小鼠肾组织的病理学影响

4．5 讨论

4．6 本章小结

第五章 结论和展望

5．1 结论

5．2 展望

5．3 创新点

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文及申报的专利