声明
引言
1 综述
1.1 CRP和SAP结构
1.2 CRP和SAP的功能
1.3 CRP和SAP在鱼中研究现状
1.4 迟缓爱德华氏菌
2 大弹涂鱼CRP/SAP（BpCRP/SAP）基因的克隆、生物信息学分析及原核表达
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 工程菌和载体质粒
2.1.3 实验试剂
2.1.4 仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 大弹涂鱼肝组织cDNA提取
2.2.3 BpCRP/SAP的PCR产物纯化
2.2.4 BpCRP/SAP基因T-A克隆及载体构建
2.2.5 重组质粒转化
2.2.6 生物信息学分析
2.2.7 表达载体构建
2.2.8 重组质粒提取
2.2.9 诱导表达
2.2.10 蛋白纯化
2.2.11 BpCRP/SAP多克隆抗体制备及纯化
2.2.12 抗体特异性验证
2.3 结果
2.3.1 BpCRP/SAP基因克隆及重组质粒验证
2.3.2 BpCRP/SAPcDNA序列分析
2.3.3 BpCRP/SAP蛋白原核表达及抗体制备
2.4 讨论
3 BpCRP/SAP在大弹涂鱼机体中抗感染分析
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 菌种
3.1.3 实验试剂
3.1.4 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 迟缓爱德华氏菌感染大弹涂鱼
3.2.2 荧光定量PCR
3.2.3 Western blot分析BpCRP/SAP在感染不同时间的血清含量变化
3.2.4 ELISA
3.2.5 存活率实验
3.3 结果
3.3.1 健康组织中BpCRP/SAP mRNA表达差异
3.3.2 E. tarda感染后主要免疫组织BpCRP/SAP mRNA表达分析
3.3.3 Western blot及ELISA分析E. tarda感染后血液中BpCRP/SAP的含量变化
3.3.4 BpCRP/SAP对大弹涂鱼存活率的影响
3.4 讨论
4 rBpCRP/SAP对大弹涂鱼MO/MΦ功能的影响
4.1 实验材料
4.1.1 实验动物
4.1.2 菌种
4.1.3 实验试剂
4.1.4 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 大弹涂鱼原代MO/MΦ的分离培养
4.2.2 E. trada FITC标记
4.2.3 rBpCRP/SAP对E. trada感染大弹涂鱼MO/MΦ相关炎症因子表达的影响
4.2.4 吞噬实验
4.2.5 杀菌实验
4.2.6 呼吸爆发
4.2.7 极化实验
4.2.8 iNOS活力测定
4.2.9 精氨酸酶活力测定
4.3 结果
4.3.1 rBpCRP/SAP对E. tarda感染大弹涂鱼MO/MΦ相关炎症因子表达的影响
4.3.2 rBpCRP/SAP对大弹涂鱼MO/MΦ吞噬能力的影响
4.3.3 rBpCRP/SAP对大弹涂鱼MO/MΦ杀菌及ROS产生的影响
4.3.4 rBpCRP/SAP对大弹涂鱼MO/MΦ极化的影响
4.4 讨论
5 结语
5.1 研究成果
5.1.3 rBpCRP/SAP对大弹涂鱼MO/MΦ功能的影响
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
在学研究成果
致谢
宁波大学;
