声明
致谢
摘要
第一章 绪论
1．1 右旋糖酐酶简介
1．2 右旋糖酐酶分类
1．2．2 习惯性分类法
1．2．3 CAZy数据库分类
1．3 右旋糖酐酶的结构及催化机制
1．4 右旋糖酐酶来源
1．5 右旋糖酐酶基因克隆表达
1．5．1 大肠杆菌表达体系
1．5．2 毕赤酵母表达体系
1．5．3 酿酒酵母表达体系
1．6 右旋糖酐酶应用
1．6．1 在医药工业的应用
1．6．2 在食品工业的应用
1．6．3 在工业上的应用
1．7 本课题研究意义
1．8 研究内容与思路
第二章 右旋糖酐酶基因合成及密码子优化
2．1 引言
2．2 实验材料
2．2．1 主要仪器与试剂
2．2．2 实验试剂
2．2．3 质粒与菌株
2．2．4 培养基
2．2．5 相关试剂配制
2．3 实验方法
2．3．1 右旋糖酐酶活力的测定方法
2．3．2 棘孢青毒右旋糖酐酶的发酵培养
2．3．3 右旋糖酐酶总RNA的提取
2．3．4 cDNA第一链合成
2．3．5 PCR扩增右旋糖酐酶基因
2．3．6 pMD-18T质粒提取
2．3．7 连接及转化
2．3．8 重组质粒筛选
2．3．9 密码子优化
2．4 结果与分析
2．4．1 右旋糖酐酶基因的合成
2．4．2 筛选重组质粒
2．4．3 右旋糖酐酶基因优化
2．5 本童小结
第三章 重组毕赤酵母的构建
3．1 引言
3．2 实验材料
3．2．1 主要仪器与试剂
3．2．2 实验试剂
3．2．3 质粒与菌株
3．2．4 培养基
3．2．5 相关试剂配制
3．3 实验方法
3．3．1 引物设计
3．3．2 重组质粒构建
3．3．3 重组表达质粒筛选
3．3．4 重组酵母构建
3．3．5 重组酵母筛选
3．3．6 重组酵母表达
3．4 结果与分析
3．4．1 重组质粒构建
3．4．2 重组质粒筛选
3．4．3 重组酵母构建
3．4．4 重组酵母表达
3．5 本章小结
第四章 重组毕赤酵母发酵条件优化
4．1 引言
4．2 实验材料
4．2．1 主要仪器与试剂
4．2．2 培养基及试剂的配制
4．2．3 相关试剂配制
4．3 实验方法
4．3．1 菌株的培养方法
4．3．2 粗酶液的酶活检测方法
4．3．3 重组酵母发酵条件优化
4．4 结果与分析
4．5 本章小结
第五章 重组右旋糖酐酶的分离纯化与酶学性质
5．1 引言
5．2 实验材料
5．2．1 菌株来源
5．2．2 主要仪器与试剂
5．2．3 培养基及试剂的配制
5．3 实验方法
5．3．1 右旋糖酐酶的分离纯化
5．3．2 重组右旋糖酐酶的酶学性质
5．4 结果与分析
5．4．1 右旋糖酐酶的分离纯化
5．4．2 右旋糖酐酶的酶学性质
5．5 本章小结
第六章 结论与展望
6．1 结论
6．2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
