棘孢木霉几丁质酶基因及其表达棘孢木霉几丁质酶的方法

摘要

本发明属于基因工程领域，具体地说是一种利用毕赤酵母工程菌株表达棘孢木霉几丁质酶的方法。发明以棘孢木霉（Trichoderma asperellum）为材料获得了1个几丁质酶基因，命名为tachi1，DNA序列为1679bp，含有3个内含子、1个1275bp的ORF，编码424个氨基酸。构建重组表达载体pPIC9K/tachi1，利用电击法转化Pichia pastoris GS115，工程菌株GS-tachi1-K接种于含BMMY培养基中，在28℃、200 rpm/min振荡培养7.5 d，几丁质酶活达到17.93 U/mL，蛋白表达量为6.19 g/L。SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为44 kDa，酶反应最适的温度和pH分别为50 ℃和5.5，50 ℃以下保持较高的酶活力，在酸性条件下稳定。该酶活性高、稳定性好，有比较重要的经济价值和社会价值。