蒜氨酸酶的分离纯化与中试生产检测

摘要

目的：大蒜（Allium Sativum L.）具有杀菌、降血脂、抗血栓、预防中风和高血压、保护肝脏和提高机体免疫力、抗癌等功能，是近代医药研究的热点之一。目前公认大蒜的功效成分是蒜氨酸（Alliin， S-allyl-L-cysteine，2-烯丙基半胱氨酸亚砜）及经蒜酶（Alliinase，EC 4.4.1.4）催化裂解产生的大蒜辣素（Allicin，allyl-2-propenethiosulfinate，2-烯丙基硫代亚磺酸酯）及阿霍烯（ajoene）等含硫化合物。蒜氨酸酶又称蒜酶或蒜氨酸裂解酶。本课题组利用现代生物制药技术从大蒜中分别提取相对稳定的蒜氨酸和蒜酶“高效大蒜新制剂”。蒜酶作为大蒜中主要的原始活性成分之一，分离和纯化蒜酶是重要的工作程序。本课题在前人研究工作的基础上进一步探索蒜氨酸酶的纯化方法。分析中试生产过程中蒜酶活力的变化，选择并确定合理的生产工艺。　　 方法：本实验采用Superdex 200 prepgrade、ConA-Sepharose等高校凝胶柱与亲和层析，透析，低温冷冻干燥等技术而得到了纯度与活力较高的蒜酶，以丙酮酸法与HPLC法测定蒜酶活力，用Bradford法测定蒜酶蛋白质含量，聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)法测定蒜酶纯度。　　 结果：本课题采用了几种纯化方法以得出了最适合做蒜酶纯化的方法，最终从50%的蒜酶原料药中得到了纯度为80%的纯蒜酶与活力为1600U/g（HPLC法）的高活力蒜酶，并且通过中试生产检测而对生产工艺的改善提供了依据。

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参考文献

综述：大蒜蒜氨酸酶的分离纯化工艺研究进展