酿酒酵母中不同强度PGK启动子文库的构建与应用

目录

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摘要

1前言

1．1酿酒酵母概述

1．2白酒中主要风味物质概述

1．2．1酯类物质

1．2．2高级醇

1．2．3酸类物质

1．2．4醛类物质

1．2．5其他物质

1．3．1乙酸酯的合成

1．3．2乙酸酯的水解

1．4酵母中高级醇主要代谢途径

1．4．1转氨反应

1．4．2脱羧反应

1．4．3脱氢反应

1．5启动子工程概述

1．5．1启动子功能的研究

1．5．2启动子工程策略

1．6．1本课题立题依据

1．6．2本课题的主要研究内容

2材料与方法

2．1．1菌株与质粒

2．1．2实验仪器

2．1．3主要试剂

2．1．4主要培养基

2．1．5主要溶液

2．2．1引物设计

2．2．2目的基因片段的获取与纯化

2．2．3重组质粒的构建

2．2．4酵母的转化

2．2．5 Real-time PCR

2．2．6发酵实验

2．3分析方法

2．3．4 AATase酶活的测定

2．3．5 EGFP相对荧光强度的测定

2．3．6 β-半乳糖苷酶的酶活测定

2．3．7乙酸酯及高级醇含量的测定

3结果与讨论

3．1 PGK启动子突变文库的构建与检测

3．1．1重组菌株a45-EWT的构建

3．1．2重组菌株a45-EwT的相对荧光强度的检测

3．1．3 PGK启动子的突变及文库的构建

3．1．4部分突变PGK启动子强度的二次检测

3．1．5小结

3．2突变PGK启动子序列分析

3．2．1突变PGK启动子测序结果和突变位点分析

3．2．2 PGK启动子上游激活序列及顺式作用元件的分析

3．2．3突变PGK启动子质粒载体的构建

3．2．4小结

3．3突变PGKp表达ATF1基因同时敲除BAT2对乙酸酯代谢的影响

3．3．1突变PGKp表达ATF1基因同时敲除BAT2菌株的构建

3．3．2ATF1及BAT2基因相对表达量的检测

3．3．3醇乙酰基转移酶的酶活检测

3．3．4突变PGKp表达ATF1基因同时敲除BAT2菌株的发酵实验

3．3．5小结

4结论

4．1全文总结

4．2创新点

4．3不足之处

5展望

参考文献

7攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢