肾上腺素能受体激动剂干预人子宫平滑肌细胞生长因子VEGF、FGF表达的实验研究

摘要

目的：本实验以国家自然科学基金资助项目（编号：81072838）为依托进行设计。在中医学“情志学说”理论基础上，结合现代医学“心理应激”理论，以体外培养的人子宫肌瘤平滑肌细胞（简称ULM细胞）为研究对象，探讨“肝郁－心理应激”通过肾上腺素能受体（Adrenergic Receptor，AR）信号转导途径，上调VEGF、FGF表达的作用机制，为临床从“肝郁－心理应激”角度防治子宫肌瘤（Uterine leiomyomas，ULM）提供新的思路及方法，并为中医学“情志学说”提供新的理论依据。　　方法：采用胶原酶消化法对UL M细胞进行原代培养，经H E及免疫组化染色法进行细胞学鉴定。将培养的ULM细胞分为4组：Α.空白组；B.去甲肾上腺素（Norepinephrine， NE）组；C.肾上腺素（Epinephrine，E）组；D.异丙肾上腺素（Isoproterenol，ISO）组。除Α组外，B组于培养液中添加NE：0.1μmol/l、1μmol/l、10μmol/l；C组于培养液中添加E：0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmo l/l；D组于培养液中添加ISO：0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmol/l。应用竞争性酶联免疫吸附法（ELISA法）分别于以下四个时间点：3h、6h、12h、24h检测细胞培养液中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor， VEGF）、成纤维细胞生长因子（Fibroblast growth factor，FGF）的蛋白表达。　　结果：　　1.成功培养了原代ULM细胞，并经HE染色及免疫细胞化学鉴定证实。　　2.各组ULM细胞培养液中VEGF蛋白表达的比较　　①N E对U LM细胞VE GF蛋白表达的影响　　不同剂量组和空白组多重分析，各剂量组VEGF蛋白表达平均测量值均高于空白组（P=0.000），1剂量组VEGF蛋白表达平均测量值最高，1剂量组和10剂量组VEGF蛋白表达平均测量值一致，差别无统计学意义（P=0.074）。　　不同测量时间点多重分析，各测量时间点的VEGF蛋白表达平均测量值不同（P=0.000），6小时的VEGF蛋白表达平均测量值最高、随后呈现下降趋势。　　②E对U LM细胞V EGF表达量影响　　不同剂量组和空白组多重分析，各剂量组VE GF蛋白表达平均测量值均高于空白组（P=0.000），10剂量组VEGF蛋白表达平均测量值最高。　　不同测量时间点多重分析，各测量时间点的V EGF蛋白表达平均测量值不同（P=0.000），6小时的VEGF蛋白表达平均测量值最高、随后呈现下降趋势。　　③ISO对ULM细胞VEGF表达量影响　　不同剂量组和空白组多重分析，1剂量组和10剂量组VEGF蛋白表达平均测量值低于空白组（P=0.000）。0.1剂量组VEGF蛋白表达平均测量值与空白组相比差别无统计学意义（P=0.167）。　　不同测量时间点多重分析，VE GF蛋白表达平均测量值随测量时间的延长呈下降趋势，除12小时和24小时 VEGF蛋白表达平均测量值一致外（P=1.000），其他测量点VEGF蛋白表达平均测量值不同，差别均有统计学意义（P<0.05）。　　3.各组ULM细胞培养液中FGF蛋白表达的比较　　①NE对ULM细胞FGF蛋白表达的影响　　不同剂量组和空白组多重分析，1剂量组和10剂量组FGF蛋白表达平均测量值高于空白组（P=0.003，P=0.001）。其余各组间组FGF蛋白表达平均测量值差别无统计学意义（P>0.05）。　　不同测量时间点多重分析，6小时和12小时的FGF蛋白表达平均测量值分别高于3小时FGF蛋白表达平均测量值（P=0.015，P=0.003），其余测量时间点的FGF蛋白表达平均测量值差异无统计学意义（P>0.05）。　　②E对U LM细胞F GF蛋白表达的影响　　不同剂量组和空白组多重分析，1剂量组和10剂量组FGF蛋白表达平均测量值高于空白组（P=0.020，P=0.000），0.1剂量组 FGF蛋白表达平均测量值与空白组一致，差别无统计学意义（P=0.322）。　　不同测量时间点多重分析，6小时和12小时的FGF蛋白表达平均测量值分别高于3小时的FGF蛋白表达平均测量值（P=0.000，P=0.001），其余测量时间点的FGF蛋白表达平均测量值差异无统计学意义（P>0.05）。　　③ISO对ULM细胞F GF蛋白表达的影响　　不同剂量组和空白组多重分析，各剂量组FGF蛋白表达平均测量值均低于空白组FGF蛋白表达平均测量值（P=0.000）。　　不同测量时间点多重分析，24小时的FGF蛋白表达平均测量值低于3小时和12小时的FGF蛋白表达平均测量值（P=0.005，P=0.042），其余测量时间点的FGF蛋白表达平均测量值差异无统计学意义（P>0.05）。　　结论：　　1.肾上腺素能受体激动剂NE、E可促进ULM细胞VEGF、FGF的表达。　　2.肾上腺素能受体激动剂ISO可降低ULM细胞VEGF、FGF的表达。　　3.因此，本课题组推测：肝郁－心理应激可能通过促进神经递质NE、E的表达，激活肾上腺素能受体信号转导途径，上调ULM细胞VEGF、FGF的表达，促进 ULM细胞增殖，而导致U LM形成。此结果为临床从肝郁－心理应激角度防治 UL M提供新的思路和方法，并为中医学“情志学说”提供新的理论依据。

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综述

参考文献

前言

实验 肾上腺素能受体激动剂干预ULM细胞VEGF、FGF表达的实验研究

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 统计学处理

2 实验结果

2.1 ULM细胞的原代培养及鉴定

2.2 各组ULM细胞VEGF蛋白表达的比较

2.3 各组ULM细胞FGF表达的比较

3 小结

3.1 肾上腺素能受体激动剂NE、E可促进ULM细胞VEGF、FGF的表达。

3.2 肾上腺素能受体激动剂ISO可降低ULM细胞VEGF、FGF的表达。

讨论

1 子宫肌瘤的病因及发病机制研究

1.1 E2、P与ULM发病相关性

1.2 生长因子与ULM发病相关性

2 “情志学说”与“心理应激理论”

2.1 “情志学说”与ULM

2.2 “心理应激学说”与ULM

2.3 “情志学说”与“心理应激学说”的相关性研究

3 心理应激演变机制

4 本课题前期工作基础

5 ULM细胞体外培养的意义

6 神经递质与肾上腺素能受体信号转导途径

6.1 神经递质、AR与VEGF、FGF的关系

6.2 肾上腺素能受体信号转导途径与ULM

7 肾上腺素能受体激动剂干预ULM细胞VEGF、FGF表达的实验研究

8 问题与展望

参考文献

攻读学位期间发表论文情况