人脂联素基因cDNA克隆及其在肥胖症患者皮下与大网膜脂肪组织中的表达

摘要

第一部分 人脂联素基因全长cDNA克隆目的克隆人脂联素(adiponectin)基因cDNA,为进一步研究adiponectin的功能提供实验基础.方法匀浆中国人大网膜脂肪垫、从中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增出adiponectin cDNA基因全长.PCR产物经凝胶电泳、割胶纯化后,亚克隆入载体pMD18-T中,形成重组载体pMD18T-adiponectin.筛选出阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后对其进行测序.结果从脂肪组织总RNA中扩增得到745bp目的片段.重组质粒pMD18T-adiponectin被EcoR Ⅰ和Sph Ⅰ内切酶切为两条带,片段的大小与理论值800bp和2637bp相符.核苷酸序列分析显示其cDNA序列与Genbank人adiponectin基因序列基本相同,仅在37位氨基酸由Thr(ACA)变成了Ala(GCA),证明已成功克隆adiponectin基因mRNA编码区.结论成功地克隆中国人adiponectin基因全长cDNA.为构建adiponectin的真核表达载体进一步研究adiponectin功能提供了物质基础.第二部分 肥胖症患者皮下、大网膜脂肪组织脂联素mRNA表达的定量研究目的 探讨肥胖症患者大网膜与腹部位下脂肪组织脂联素mRNA的表达水平及与体重指数(BMI)、腰围、臀围、腰殿比(WHR)、血脂、胰岛素敏感性的相关关系.方法 用半定量RT-PCR方法检测28例非肥胖症患者和19例肥胖症患者大网膜与腹部皮下脂肪组织脂联素mRNA的表达水平,并测量身高、体重、腰围、殿围、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、计算体重指数(BMI)和腰臀比(WHR).测空腹血糖(FRG)、胰岛素(FINS)、血脂,计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果 (1)肥胖组网膜脂肪组织联素mRNA表达水平低于腹部皮下脂肪组织(P<0.05),肥胖组大网膜脂肪组织联素mRNA表达较非肥胖组下降(P<0.05).(2)肥胖组血浆TG与VLDL-C(P<0.05)、FINS与HOMA-IR(P<0.01)、SBP与DBP(P<0.01)高于非肥胖组,ISI低于非肥胖组(P<0.01).(3)脂肪组织脂联素mRNA表达与各指标的偏相关分析显示非肥胖组中网膜脂肪组织联素mRNA表达量与BMI(r=-0.513,P<0.05)、VLDL-C(r=-0.733,P<0.01)显著负相关,与年龄、WHR、血压、FPG、FINS、ISI、HOMA-IR无显著相关性(P>0.05).结论 肥胖症患者大网膜脂肪组织联素mRNA表达水平显著降低,肥胖症患者有显著升高的SBP、DBP、TG、VLDL-C、FINS、HOMA-IR和显著降低的ISI;在非肥胖组中,网膜脂肪组织脂联素mRNA表达量与BMI、VLDL-C显著负相关;提示肥胖症患者网膜脂肪组织联素mRNA表达降低可能性与肥胖相关的代谢综合征的发病中起一定作用.

目录

缩写词表

第一部分人脂联素基因全长eDNA克隆

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

第二部分肥胖症患者皮下、大网膜脂肪组织脂联素mRNA表达的定量研究

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

附录一个人简历

附录二致谢

综述脂联素（ADIPONECTIN）的研究概况

参考文献