尼古丁对兔骨髓源成骨细胞体外增殖和分化成骨能力的影响

摘要

目的：体外分离培养兔骨髓基质细胞，成骨诱导分化成骨髓源成骨细胞，通过实验研究不同浓度尼古丁对兔骨髓源成骨细胞(marrow-origin osteoblasts，MOOBs)体外增殖和成骨分化的影响，以期了解尼古丁对牙种植体骨整合的影响，及在牙周炎和种植体周围炎发生发展中的作用机制。 方法： 选取健康2月龄新西兰大白兔，麻醉状态下取股骨，采用全骨髓贴壁法获取骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)。传代培养，体外成骨诱导培养第3代兔骨髓基质细胞，使之分化为骨髓源成骨细胞(marrow-origin osteoblasts，MOOBs)并鉴定。用含不同浓度尼古丁的成骨条件培养液培养MOOBs，于第1、3、5、7天，采用MTT比色法检测尼古丁对MOOBs增殖的影响，采用磷酸苯二钠比色法测定MOOBs的碱性磷酸酶(ALP)活性，评价其分化成骨能力。 结果： (1)本实验中分离的BMSCs在10nmol/L地塞米松、10mmol/L β-甘油磷酸钠、50mg/L L-抗坏血酸的诱导条件下细胞形态逐渐变为短梭形、多角形，可以向成骨细胞分化，碱性磷酸酶染色表达阳性，Von kossa染色鉴定成骨细胞，细胞密集区出现大面积黑染区域，即钙结节。 (2)在不同浓度尼古丁的作用下，1μg/ml及以下低浓度尼古丁组与对照组相比对MOOBs的增殖无明显抑制作用(P>0.05)，10μg/ml浓度组第5、7天、100μg/ml浓度组对细胞增殖表现出抑制作用(P<0.05)；1μg/ml及以下低浓度组对细胞ALP活性无显著影响，10μg/ml第3、5、7天及100μg/ml浓度组可降低细胞ALP活性(P<0.05)；高浓度尼古丁对MOOBs增殖与ALP活性均表现出浓度与时间依赖性抑制。 结论： (1)本实验分离培养的BMSCs在特定的诱导条件下可以向成骨细胞分化，成为骨髓源成骨细胞，用于体外实验研究。 (2)本实验结果中吸烟者人体血浆所能达到的尼古丁浓度对骨髓源成骨细胞的增殖与ALP活性没有抑制作用，提示尼古丁对种植体骨整合及在牙周炎和种植体周围炎发生、发展中不是通过全身血液系统发挥影响作用。考虑到尼古丁在唾液中可以达到很高的浓度，且具有很强的粘膜渗透性，故可能是通过口腔局部发挥影响作用。同时，由于低浓度的尼古丁对骨髓源成骨细胞的增殖与ALP活性没有抑制作用，我们应该认识到，烟雾中含有大量毒素，吸烟对种植体周围炎及牙周炎的影响因素是多方面的，尼古丁应该只是其中一个促进因素。

目录

论文说明：中英文缩略词表

声明

实验设计与流程图

1.前言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5.结论

6.进一步研究方向

参考文献

附录：个人简历

致谢

综述 吸烟对种植牙的影响