苦参碱诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡的体外研究

摘要

研究背景：视网膜母细胞瘤（retinoblastoma，Rb）是婴幼儿最常见的原发性眼内恶性肿瘤，在我国治疗以眼球摘除及眼外放疗为主，而发达国家越来越趋向用个性化综合治疗，其中包括眼球摘除、外照射放疗(EBRT)、近距放疗、温热疗法（TTT）、化学减容、全身化疗等。而化学治疗是保守治疗的主要方法之一。苦参碱(matrine，Mat)是传统中药苦豆子等的主要有效成分。多项体外研究发现苦参碱具有剂量、时间依赖性地诱导多种肿瘤细胞发生凋亡的作用，小剂量苦参碱也可抑制肿瘤细胞增殖与诱导细胞分化。
　　 目的：探讨苦参碱体外诱导人视网膜母细胞瘤细胞株凋亡作用，为其在视网膜母细胞瘤治疗中的应用前景提供实验依据。
　　 方法：以体外培养的人视网膜母细胞瘤细胞株为研究对象，0.4mmol/L浓度的苦参碱分别作用视网膜母细胞瘤细胞（Rb）12小时、24小时、48小时，阴性对照组以等量含10％类标准胎牛血清 RPMI-1640 培养液替代苦参碱。离心，收集细胞，用冷PBS洗涤三次，依据AnnexinV-FITC/PI双染试剂盒说明染色，流式细胞仪检测细胞凋亡率。并进行统计学分析。
　　 结果：苦参碱作用视网膜母细胞瘤细胞（Rb）12h后可观察到细胞开始凋亡，48h内呈时间依赖性。流式细胞仪检测未经药物作用的细胞凋亡率仅为6.71±0.31％,加入作用12小时后，细胞凋亡率增加至14.88±0.99％,与对照组比较,差异有统计学意义。随着作用时间的延长，细胞凋亡率逐步增加，24小时细胞凋亡率达到21.07±0.61％，48小时细胞凋亡率达35.67±0.98％。与对照组比较差异具有统计学意义（р＜0.05）。苦参碱作用Rb细胞12小时后早期凋亡细胞占凋亡细胞的89.20％，24h早期凋亡细胞占.78.97％，.48h早期凋亡细胞占76.12％。
　　 结论：Ma能够诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡，促进凋亡能力有时间依从性，其诱导Rb细胞凋亡的机制可能与细胞周期阻滞有关，为Rb药物治疗提供实验依据。