中国肝移植患者霉酚酸药动学及其代谢物肠肝循环研究

摘要

霉酚酸(mycophenolic acid，MPA)是免疫抑制治疗方案的重要组成部分，广泛应用于肾、肝脏和心脏的移植后免疫抑制治疗。本研究测定MPA及体内代谢物浓度，研究肝移植患者服用麦考酚钠肠溶片(enteric-coated mycophenolate sodium，EC-MPS)后的药动学过程及转运体基因多态性对药动学影响。同时运用动物模型，研究MPA在大鼠体内的肠肝循环(entero hepatic circulation，EHC)过程，进一步为提高移植患者MPA个体化治疗水平奠定理论基础。　　本研究首先建立了LC-MS/MS法同时测定生物样本中 MPA及其代谢物7-O-葡糖苷酸MPA(7-O-glucuronide conjugate of MPA，MPAG)、酰化葡萄糖醛酸代谢物(acyl glucuronide of MPA，AcMPAG)浓度。100μl人/大鼠血浆及大鼠胆汁稀释液样本加入300μl含内标吲哚美辛的乙腈沉淀，离心后取上清液进样。采用甲酸铵水溶液-甲醇为流动相，采用梯度洗脱的方法，流速0.3 mLμmin-1。用多反应监测进行定量，电喷雾离子化源（ESI）负离子方式进行检测，定量离子对分别为 m/z319.1→274.9(MPA)、m/z495.3→174.4(MPAG与 AcMPAG)与 m/z356.1→312.0(内标吲哚美辛)。结果人/大鼠血浆中 MPA在0.10~50.5μgμmL-1，MPAG在1.13~450μgmL-1，AcMPAG在0.11~22.4μgμmL-1测定范围内线性良好(r2>0.99)；大鼠胆汁中MPA在0.02~20.2μgμmL-1，MPAG在0.12~112.5μgμmL-1，AcMPAG在0.028~22.4μgμmL-1范围内线性良好(r2>0.99)；测量准确度、精密度符合生物样品的分析要求，CV均小于15％；MPA及代谢物 MPAG、AcMPAG的提取回收率分别为73.3%~87.7%，77.3%~88.2%，72.3%~84.4%；基质效应分别为74.6%~83.5%，77.6%~85.1%，80.2%~83.6%。本研究所建立的方法专属性强、回收率高，适用于MPA及其代谢物的血药浓度监测和人体药动学研究。　　进一步研究了28例肝移植患者服用EC-MPS后不同阶段MPA及其代谢物的药动学特征。采集了全部患者服用EC-MPS后第1周和第3周0~12 h血标本，采用LC-MS/MS法测定MPA、MPAG、AcMPAG血浆中药物浓度，采用非房室法计算药动学参数。服用EC-MPS1周与3周后，28位患者MPA的Cmax、AUC0-12、t1/2分别为（18.1±8.75）与（20.7±16.0）μgμmL-1、（42.7±17.5）与（47.1±23.9）μg·h·mL-1、（3.33±2.81）与（3.30±1.89）h，其主要药动学参数在第1周与第3周差异无显著统计学意义；AcMPAG的Cmax、AUC0-12、t1/2分别为（2.50±1.86）与(1.78±1.72)μg·mL-1、(14.5±11.7)与(6.97±6.57)μg·h·mL-1、(4.48±2.53)与(3.76±1.89) h，给药后第1周AcMPAG的AUC0-12显著高于第3周(P<0.01)；MPAG的Cmax、AUC0-12、t1/2分别为(171.6±135.4)与(152.2±115.9)μg·mL-1、(1299±1204)与(1051±561)μg·h·mL-1、(8.73±4.25)与(7.75±2.87) h，MPAG的主要药动学参数在第1周与第3周差异无显著统计学意义。服用吗替麦考酚酯（MMF）与EC-MPS患者的MPA的Cmax、Tmax、t1/2存在显著差异(P<0.05)；治疗3周后代谢物MPAG的Cmax、AUC0-12显著高于服用MMF的患者(P<0.05)。结果证明不同阶段MPA蓄积不明显，与服用MMF的患者相比，EC-MPS吸收延缓，而服用不同制剂患者MPA的体内暴露差异并无显著统计学意义。　　在此基础上，我们采用SnapShot法分析28位肝移植受体与其中14位的供体的SLCO1B1、SLCO1B3、ABCB1、ABCC2等转运体基因多态性，并分析不同转运体基因型对MPA及其代谢物药动学参数的影响。发现供体SLCO1B1的A388G与SLCO1B3的G669A不同基因型患者，MPA的AUC0-12(P=0.025与P=0.045)、AUC0-∞（P=0.093与P=0.055)、AUC6-12(P=0.025)存在差异；供体ABCC2-24CC基因型AUC0-12、AUC0-∞∞、AUC6-12与CT型也有差异(P值分别为0099、0.067与0.079)。而肝移植受体的ABCB1基因型也对MPA体内过程存在一定影响，ABCB13435TT型患者的AUC0-12、AUC0-∞高于CC、CT型患者(P=0.088和P=0.079)。另一方面，转运体基因型对 MPAG的体内暴露也存在显著影响，14位肝移植供体不同SLCO1B1 T521C与SLCO1B3 T344G患者的AUC0-12、Cmax有显著差异(P<0.05)。转运体基因多态性可以部分解释移植患者给予EC-MPS后个体差异。　　随后，我们利用动物模型研究MPA在体内的EHC过程。大鼠分为三组：第一组经颈静脉给予MPA聚乙二醇400溶液20mgμkg-1，尾静脉取血并测定给药前与给药后0-12hMPA与代谢物血药浓度；第二组给药后大鼠采用胆管插管收集胆汁，测定给药后不同时段的胆汁MPA排出量；第三组大鼠进一步分为胆汁供体组和受体组，分离胆汁供体组大鼠胆管并将其胆汁引流入受体组大鼠，分别测定供体大鼠给予MPA后两组大鼠MPA及代谢物血浓度。经检测，大鼠静脉注射给予MPA后的体内药动学过程符合二房室一级吸收模型，单次给药后MPA的AUC为(43.3±20.4)μg·h·mL-1。MPA进入大鼠体内后，约8h后以MPAG的形式进行肠肝循环后出现第二吸收峰。静脉注射MPA后原型药物在4-6h内胆汁中排出量最多，为0.120±0.165 mg，累积胆汁排泄0.603±0.421 mg（约为给药量的10%）。EHC模型显示，胆汁供体组大鼠和胆汁受体组大鼠AUC分别是（42.3±27.1）和（4.28±3.05）μg·h·mL-1，估算约10%的MPA重新进入循环。大鼠模型发现10%的MPA以MPAG形式从胆汁排入肠道，并几乎完全以MPA形式重吸收，吸收峰出现于给药后8h。

目录

声明

缩略语表

前言

参考文献

第一章 LC-MS/MS同时测定生物样本中霉酚酸及其代谢物浓度方法学的建立

1. 引言

2. 材料与方法

3. 结果

4. 讨论

参考文献

第二章 中国肝移植患者服用麦考酚钠肠溶片后霉酚酸及其代谢物的药动学研究

1. 引言

2. 材料与方法

3. 结果

4. 讨论

参考文献

第三章 转运体基因多态性对肝移植患者MPA及其代谢物药动学影响

1. 引言

2. 材料与方法

3. 结果

4. 讨论

参考文献

第四章 霉酚酸在大鼠体内的肠肝循环模型

1. 引言

2. 材料与方法

3. 结果

4. 讨论

参考文献

结论

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