铜绿假单胞菌的耐药性及其多重耐药株β-内酰胺酶耐药基因的研究

摘要

目的：
　　 了解临床下呼吸道标本中分离的铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的耐药情况,为临床合理使用抗生素提供参考。
　　 对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶检测及相关耐药基因的研究。
　　 材料与方法:
　　 收集2009年安徽医科大学第一附属医院下呼吸道标本中无重复分离的铜绿假单胞菌90株，所有菌株采用Microscan WalkAway-40全自动微生物分析仪及其配套产品Negative Combo Panel Type 31(革兰阴性复合板31)进行鉴定和药敏试验。
　　 对筛选出的39株多重耐药铜绿假单胞菌采用三维试验和EDTA协同实验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、AmpC酶和金属β-内酰胺酶（MBLs）。
　　 聚合酶链反应（PCR）技术检测18种β-内酰胺酶耐药基因及外膜蛋白OprD基因并进行测序分析。
　　 结果：
　　 在体外药敏试验中，氨基糖苷类抗菌药物显示出较高的敏感性，分别为：阿米卡星（70％）、妥布霉素（68％）、庆大霉素（59％）；其次是环丙沙星（58％）、亚胺培南（56％）、左氧氟沙星（54％）、头孢吡肟（50％）；哌拉西林/三唑巴坦、氧哌嗪青霉素、替卡西林/棒酸的耐药率最高，达100％。
　　 三维试验结果显示，7株产ESBLs(25.9％)，5株产AmpC酶(18.5％)，4株同时产ESBLs+AmpC酶(14.8％)，EDTA协同实验检测4株产MBLs(14.8％)。
　　 PCR结果显示OXA-10阳性7株，与三维试验结果相同，VIM-2阳性2株，34株OprD基因缺失，其余基因均未检出。
　　 结论：
　　 铜绿假单胞菌对临床常用14种抗菌药物均存在不同程度的耐药现象，对氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物的敏感性较高；青霉素及含酶抑制剂的β-内酰胺类抗生素在治疗过程中可产生诱导酶，使细菌产生耐药性；第三代头孢菌素、单环β-内酰胺类因其较高的耐药率，已不适宜治疗临床上铜绿假单胞菌引起的感染。
　　 目前治疗由铜绿假单胞菌引起的下呼吸道感染，可以首先选用氨基糖苷类及喹诺酮类抗菌药物，其次是亚胺培南、第四代头孢菌素，然而由于氨基糖苷类及喹诺酮类抗菌药物存在肾毒性、耳毒性及中枢神经系统反应等副作用，在治疗过程中应引起足够重视。
　　 研究表明，携带OXA-10、VIM-2及OprD基因缺失是导致我院多重耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要机制。
　　 表型鉴定检测MDRPA产生的β-内酰胺酶，与PCR结果基本一致，其操作简单，方便，适用于临床快速检测。