成年期甲状腺功能减退症大鼠背侧海马内突触复合体蛋白的表达

摘要

目的：观察成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠背侧海马内突触复合体可溶性N-乙基马来酰胺敏感因子附着蛋白受体(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor,SNARE)蛋白SNAP-25(synaptosomal-associated protein of25 kDa)、syntaxin-1、VAMP-2(vesicular-associated membrance protein-2)的表达变化及左旋甲状腺素(Levothyroxine,L-T4)替代治疗后改变的蛋白水平的恢复状况。
　　方法：健康3月龄成年雄性Sprague-Dawley大鼠45只,体重250～300g,适应性喂养1周后随机分为4组:(1)甲减组(Hypo组,n=12)大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100g体重(WB)共6周;(2)常规剂量组(T4-5组,n=11)大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100gWB共6周,第5周起每日同时给予L-T45 mg/100g WB;(3)大剂量组(T4-20组,n=11)大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100gWB共6周,第5周起每日同时给予L-T420mg/100g WB;(4)正常对照组(C组,n=11)大鼠每日腹腔注射同体积生理盐水共6周。所有大鼠每周称重一次,根据体重调整给药剂量。造模结束后24小时,经腹主动脉采血后迅速取脑,应用放射免疫法检测大鼠血清T3、T4水平,Western blot方法测定背侧海马内SNARE突触复合体蛋白SNAP-25、syntaxin-1及VAMP-2表达水平,对条带进行相对光密度分析,通过突触复合体蛋白与内参GAPDH的条带的光密度值的比值来间接反映突触复合体蛋白的表达量。所有数据以x±s表示,应用SPSS13.0for Windows统计软件进行单因素方差分析(oneway-ANOVA)。进一步Post hoc分析用LSD法进行多重比较。Ps<0.05为差异有显著性。
　　结果：1.各组大鼠体重变化造模前各组大鼠体重无统计学差异(F(3,42)=0.21,P=0.93)。造模结束后,正常对照组大鼠体重较造模前增加49.0％;甲减组、T4-5组、T4-20组体重较前分别增加21.5%、32.5%和26.1%,各组体重与正常对照组相比均明显下降(与正常对照组比较,Ps<0.05)。
　　2.血清T3、T4水平
　　与正常对照组相比,甲减组大鼠血清T3、T4水平均显著降低(Ps<0.02),分别为正常对照组的53.6%、77.5%;T4-5组大鼠血清T3、T4恢复至正常对照组水平(Ps>0.05),分别为正常对照组的96.9%、99.7%;T4-20组大鼠血清T3、T4显著高于正常对照组(Ps<0.001),分别为正常对照组的171.8%、175.1%。
　　3.各组大鼠海马内SNAP-25、syntaxin-1、VAMP-2蛋白表达情况
　　(1)与正常对照组比较,甲减组大鼠背侧海马突触小体内SNAP-25蛋白表达显著增多(Ps<0.05),为正常对照组的135.8%;T4-5组、T4-20组大鼠背侧海马突触小体内SNAP-25表达分别为正常对照组的120.1%、110.3%,差别均无统计学意义(Ps>0.05);与甲减组比较,T4-5组SNAP-25表达减低15.7%,差别无统计学意义(Ps>0.05),T4-20组减低25.5%,差别有明显统计学意义(Ps<0.05)。
　　(2)甲减组大鼠背侧海马突触小体内syntaxin-1蛋白表达与正常对照组比较显著增加多(Ps<0.05),为正常对照组的139.4%;T4-5组、T4-20组大鼠背侧海马突触小体内 syntaxin-1表达与正常对照比较均无统计学意义差异(Ps>0.05),分别为正常对照的127.9%,121.4%;与甲减组比较,T4-5组syntaxin-1表达减低11.5%,T4-20组表达减低18%,差别均无统计学意义(Ps>0.05)。
　　(3)VAMP-2蛋白表达在各组间无统计学意义差异(Ps>0.05)。
　　结论:1.甲减可致成年期大鼠背侧海马内SNAP-25和syntaxin-1表达增加, VAMP-2表达无统计学意义改变。
　　2.给予常规剂量甲状腺素替代治疗至血清甲状腺激素水平正常时,能够使增加的SNAP-25和syntaxin-1蛋白表达水平恢复,与正常对照相比无统计学意义差别;
　　3.给予大剂量甲状腺素后,血清甲状腺激素水平明显高于正常水平, SNAP-25和syntaxin-1蛋白表达水平有进一步恢复趋势,更接近对照组水平。

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1引言

2 材料和方法

2.1 实验动物及分组

2.2 主要实验仪器及试剂

2.3 模型制备

2.4 标本制备

2.5 血清甲状腺激素检测

2.6 突触小体提取和Western blot检测

2.7 统计学处理

3 结果

3.1 各组大鼠体重变化

3.2 各组大鼠血清T3、T4水平

3.3 甲减大鼠海马内突触复合体蛋白表达及不同剂量甲状腺素治疗后恢复情况

4 讨论

4.1 甲减及L-T4治疗模型的建立

4.2 体重变化

4.3 SNARE蛋白的分布和作用

4.4 成年期甲减大鼠海马内SNARE蛋白表达情况

4.5 常规剂量甲状腺素替代治疗对SNARE蛋白表达的影响

5 结论

参考文献

附 录

致谢

综述