雌二醇,孕酮对MA891乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响及相关机制的研究

摘要

目的
　　本研究探讨雌二醇(estradiol,E2),孕酮(progesterone,P)对MA891乳腺癌细胞侵袭和迁移能力影响,以及对MA891乳腺癌细胞表达FGF1、FGFR1、MMP2和MMP9表达的影响,从而初步分析MA891乳腺癌细胞侵袭及迁移的机制。
　　方法
　　1.从荷瘤TA2小鼠取出肿瘤组织,原代培养TA2小鼠自发性乳腺癌MA891细胞(TA2MA891),待稳定传代后建立起MA891乳腺癌细胞系。将MA891乳腺癌细胞接种于正常TA2小鼠皮下,观察肿瘤生长情况。
　　2.划痕实验及Transwell小室法检测E2、P二者单独及联合作用对MA891乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。
　　3.细胞免疫组化观察MA891乳腺癌细胞在E2、P二者单独及联合作用下FGF1、FGFR1、MMP2、MMP9表达。
　　4.运用Image-ProPlus6.0图像分析软件进行免疫组化图片光密度分析,以平均光密度(averageoptical,AOD)值代表免疫组化染色的强度作为观察指标。运用SPSS13.0统计软件包处理数据结果。数据结果采用单因素方差分析(onewayANOVA),进一步用LSD法进行多组间比较。P<0.05时认为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1.皮下接种MA891乳腺癌细胞的10只小鼠,均在接种后18天内出现明显肿瘤生长。
　　2.E2、P及二者联合对MA891乳腺癌细胞迁移侵袭的影响。
　　划痕实验和Transwell小室法检测显示,E2、P能使MA891细胞迁移和侵袭能力产生显著影响,通过人工基底膜的MA891乳腺癌细胞数量较对照组明显增加(P<0.01)。
　　E2增加MA891细胞迁移和侵袭能力(P<0.01,P<0.05)。
　　P增加MA891细胞迁移和侵袭能力(P<0.01,P<0.05)。
　　E2+P共同作用下MA891细胞迁移和侵袭能力较单纯E2及单纯P作用下高(P<0.05)。
　　4.E2、P及二者联合对MA891乳腺癌细胞表达FGF1、FGFR1、MMP2、MMP9的影响。细胞免疫组化显示:E2能使MA891乳腺癌细胞表达FGF1、FGFR1、MMP2、MMP9上调。较正常对照组差异对均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05)。
　　P能使MA891乳腺癌细胞表达FGF1、FGFR1、MMP2、MMP9上调。较正常对照组差异对均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05)
　　E2+P共同作用下FGF1、FGFR1、MMP2、MMP9表达较单纯E2及单纯P作用高(P<0.05,P<0.05)
　　结论:
　　1.雌二醇、孕酮对MA891细胞迁移和侵袭能力存在正性调节。
　　2.雌二醇、孕酮调节MA891细胞迁移和侵袭能力的机制可能为:使MA891细胞FGF1、FGFR1、MMP2、MMP9表达量上调,从而增加细胞迁移和侵袭能力。

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英文缩略词表(Abbreviation)

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1. 前言

2.实验材料与方法

2.1 实验动物

2.2 主要实验材料

2.2 实验方法

3.结果

3.1 MA891乳腺癌细胞的生长情况

3.2 雌二醇，孕酮对MA891细胞侵袭迁移影响

3.3 细胞免疫组化法测定雌二醇，孕酮对MA891细胞FGF1、FGFR1、MMP2、MMP9表达影响

4.附图

3.讨论

3.1 E2、P与妊娠相关乳腺癌发展的关系

3.2 FGF1 FGFR1与妊娠期乳腺癌转移的相关关系

3.3 MMP2，MMP9促进妊娠期乳腺癌转移的相关机制

结论

展望

参考文献

附 录

致谢

综述