5-氮杂-2-脱氧胞苷对人胰腺癌细胞株Panc-1细胞生物学行为的影响及机制

摘要

目的:基因启动子CpG岛的甲基化常常会导致基因的静默,在胰腺癌中也发生基因的异常甲基化,导致一些抑癌基因的静默。DNA甲基化抑制剂能够逆转异常转变的静默基因,使静默的抑癌基因重新表达,从而发挥抗肿瘤效应。目前已研究发现几种甲基转移酶抑制物,其中5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)具有较好的甲基转移酶抑制效应。本文的目的是研究甲基化抑制物5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预对胰腺癌细胞株Panc-1生物学行为的影响,并探讨其发挥作用的机制及胰腺癌治疗中的应用前景。
　　方法:用不同浓度的5-Aza-CdR处理Panc-1细胞株72h后,采用MTT比色法检测干预前后细胞增殖活性的变化,流式细胞术(FCM)法检测干预前后细胞凋亡率的变化,caspase-3活性测定检测5-Aza-CdR诱导凋亡的能力。划痕迁移试验和transwell小室法观察干预前后细胞侵袭转移能力的改变,免疫荧光染色法检测干预前后细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。
　　结果:经5-Aza-CdR干预后,与对照组相比,PANC-细胞增殖活性明显受到抑制,细胞凋亡率明显提高,差异有统计学意义(P<0.05),并且呈剂量依赖关系。而且Panc-1细胞的侵袭转移能力明显减弱,细胞内MMP-2的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),并呈剂量依赖关系。
　　结论:5-Aza—CdR可以明显抑制胰腺癌细胞株Panc-1的生长增殖,并诱导细胞发生凋亡。同时可以抑制胰腺癌细胞的侵袭转移能力,机制可能是下调癌细胞基质金属蛋白酶的表达而发挥作用。5-Aza—CdR对胰腺癌的生物学行为具有明显的抑制作用,具有一定的临床应用前景。

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1 引言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 细胞培养

2.3 MTT法测定细胞增殖

2.4 晚期细胞凋亡的检测

2.5 Caspase-3活性测定

2.6 划痕迁移实验

2.7 免疫荧光染色法检测MMP-2的表达

2.8 transwell小室体外侵袭实验

2.9 统计分析

3 结果

3.1 5-Aza-CdR对Panc-1细胞的增殖抑制作用

3.2 5-Aza-CdR干预前后Panc-1细胞凋亡率的变化

3.3 5-Aza-CdR对各组细胞Caspase-3活性的影响

3．4 5-Aza-CdR干预前后Panc-1细胞迁移能力的改变

3.5 5-Aza-CdR对MMP-2表达的影响

3.6 5-Aza-CdR对Panc-1细胞侵袭能力的影响

4 讨论

5 结论

参考文献

附 录

致谢

TFPI-2的生物学作用及其与肿瘤的关系