人脐带间充质干细胞对炎症性肠病小鼠模型的治疗作用及移植相关问题探讨

摘要

目的:采用TNBS构建炎症性肠病小鼠动物模型,探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对TNBS诱导的炎症性肠病小鼠模型的治疗作用及可能的机理,以及细胞输注途径、细胞数量等移植相关问题对疗效的影响,以期获得脐带间充质干细胞移植治疗炎症性肠病的临床前研究数据。
　　方法:一、炎症性肠病小鼠动物模型的构建:采用单次灌肠及皮肤致敏联合灌肠两种方法,55只SPF雄性BALB/c小鼠随机分为7组,包括对照组、不同剂量TNBS单次灌肠组(100、150、175、200、225mg/kg)及皮肤致敏联合灌肠组。各组于造模后5天取材,观察结肠大体形态并评分;取病变处进行石蜡包埋切片,HE染色,并进行病理组织学评分。根据动物体重变化、死亡率、大体评分及病理组织学评分结果,筛选最佳的模型制备方法。二、hUC-MSCs对炎症性肠病小鼠模型的治疗作用研究。采用皮肤致敏联合灌肠制备炎症性肠病小鼠模型,观察hUC-MSCs输注对肠道损伤的治疗作用,根据动物的生存率,体重变化,大体评分和病理评分进行疗效评价。并检测血清中炎症因子IL-10,IL-6,TNF-α,IFN-γ的含量,以及应用CFSE标记和人抗核抗体免疫荧光检测hUC-MSCs在肠道的植入和存活,初步探讨hUC-MSCs治疗炎症性肠病小鼠模型的可能机理。三、hUC-MSCs治疗炎症性肠病小鼠模型移植相关问题探讨。1、不同移植途径比较:hUC-MSCs分别经尾静脉和腹腔两种不同途径移植入体内,观察疗效的差异,观察指标包括生存率,体重变化,大体评分和病理评分。2.不同移植细胞数量比较:灌肠后小鼠随机分为5组,包括对照组、不同剂量hUC-MSCs组(2×104、6×104、2×105、6×105/只),各组于移植后观察生存率和体重的变化。
　　结果:一、单次灌肠和皮肤致敏联合灌肠制备炎症性肠病小鼠模型:100、150mg/kgTNBS单次灌肠组动物未见到明显的溃疡形成;其余剂量组动物均有不同程度的溃疡形成,造模成功率与剂量成正比,其中225mg/kg诱导组动物成模率为100％,但病变较重、病变不均一且偶有小鼠眼睛失明的副作用出现。皮肤致敏联合灌肠组动物均有溃疡形成,造模成功率100%,病变适中且未发现小鼠眼睛失明的副作用。表明皮肤致敏联合灌肠是制备TNBS诱导的炎症性肠病小鼠模型的最佳方法。二、hUC-MSCs对炎症性肠病小鼠模型具有明显的治疗效果。hUC-MSCs经尾静脉移植后可以归巢到肠道,降低受损结肠组织大体和病理评分,并且可以改善小鼠生存率。hUC-MSCs移植可下调血清中炎症因子IL-6,IFN-γ,TNF-α含量,上调抑炎因子IL-10的含量。三、不同途径、不同细胞数量移植hUC-MSCs对炎症性肠病小鼠模型的治疗作用有差异。尾静脉和腹腔输注hUC-MSCs均可以降低受损结肠组织大体和病理评分,但在改善生存率方面腹腔移植途径要优于尾静脉移植途径;而尾静脉移植的溃疡修复效果优于腹腔移植。hUC-MSCs细胞数量过高或过低均不能有效改善小鼠生存率变化和体重变化,只有在合适的范围内才能发挥治疗效果。
　　结论:175mg/kg~225mg/kgTNBS单次灌肠及皮肤致敏联合TNBS灌肠均可制备小鼠炎症性肠病模型;皮肤致敏联合TNBS灌肠制备的炎症性肠病模型造模成功率高,病变适中,模型稳定;hUC-MSCs对TNBS诱导的炎症性肠病小鼠模型有治疗作用,移植后可以归巢到肠道;腹腔注射和尾静脉移植hUC-MSC对IBD小鼠模型均有治疗作用,尾静脉移植的溃疡修复效果优于腹腔移植;腹腔输注hUC-MSCs在改善生存率方面优于尾静脉移植;细胞数量对hUC-MSC治疗的疗效有影响,过高或过低的细胞量均不能有效产生治疗效果。但最佳细胞数量仍需通过进一步扩大样本量以进行确认。

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缩略语索引

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英文摘要

前言

参考文献

第一部分 炎症性肠病小鼠模型的建立及其影响因素的探讨

一．材料与方法

1. 材料

2. 方法

二、 实验结果

1. 死亡率

2. 小鼠一般状况

3. 小鼠体重变化

4. 大体形态学观察及评分

5. 病理组织学观察及评分

三、讨论

参考文献

第二部分 人脐带间充质干细胞对炎症性肠病小鼠模型的治疗作用及移植相关问题探讨

一、材料与方法

1. 材料

2. 方法

二、实验结果

1 hUC-MSCs细胞形态学观察及免疫表型检测

2. 细胞移植后动物的观察和评价

三、讨论

参考文献

结论

附录

致谢

综述