IL-10受体基因多态性与慢性HBV感染的遗传易感性研究

摘要

目的:IL-10和IL-10R是重要的免疫相关基因，IL-10可以配合IL-10R结合来发挥抗炎和调节的作用。有研究显示在 HBV感染的患者中，IL-10的表达水平明显增加。因此，本实验通过对白介素-10受体（IL-10R）两个标签单核苷酸多态性（tag SNP）：rs2228055、rs2256111的研究，探讨IL-10R的基因多态性与乙型肝炎病毒（HBV）感染后慢性化的相关性。
　　方法:收集中国汉族人群中慢性HBV感染患者外周血标本501例作为病例组，另收集自限性HBV感染恢复期患者外周血标本301例作为对照组。两组患者的性别、年龄、地区来源均相互匹配。其中慢性HBV感染者的入组标准参照2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准。而急性自限性HBV感染恢复期患者的入组标准为：①无乙肝疫苗接种史；②乙肝表面抗原（HBsAg）阴性；③乙肝表面抗体（HBsAb）阳性和乙肝核心抗体（HBc-Ab）阳性，并且经过两次复检均为阳性者；④HBV-DNA阴性；⑤谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）在正常范围值内。采集实验人群的外周静脉血提取基因组DNA，在Hapmap数据库IL-10R基因中找到两个tag SNP：rs2228055、rs2256111。然后采用多重单碱基延伸SNP分型技术（Snapshot）检测以上两个tag SNP的基因型。两组之间基因型及等位基因频率分布用χ2检验进行比较。
　　结果:（1）IL-10R基因tagSNP rs2228055、rs2256111多态等位基因和基因型频率在两组中的分布均符合 Hardy-Weinberg平衡。两组患者的年龄、性别差异均无统计学意义。
　　（2）IL-10R基因tagSNP rs2228055位点基因型AA、GA、GG在慢性HBV感染者中的频率分布分别为49.9％（250/501）、42.9%(215/501)、7.2%(36/501)，在急性自限性HBV感染患者中的频率分布为51.5%（155/301）、35.5%（107/301）、13.0%（39/301）。P值分别为AA，P=0.662，OR[95%可信区间(CI)]=0.94(0.71-1.24)；GA，P=0.039，OR[95%可信区间(CI)]=1.36(1.02-1.83);GG，P=0.007，OR[95%可信区间(CI)]=0.52(0.32-1.38)。其中位点G/G基因型频率（7.2%）明显低于急性自限性HBV感染患者（13.0%），差异有统计学意义（P<0.05）；GG基因型在HBV感染慢性化的风险是AG+AA基因型的0.52倍（OR=0.52，95%CI:0.32-0.84）。tagSNP rs2256111位点基因型AA、GA、GG在慢性HBV感染者中的频率分布分别为10.6%（53/501）、46.1%(231/501)、43.3%(217/501)，在急性自限性HBV感染者中的频率分布分别为15.6%(47/301)、37.9%(114/301)、46.5%(140/301)。P值分别为AA，P=0.037，OR[95%可信区间(CI)]=0.64(0.42-0.98)；GA，P=0.023，OR[95%可信区间(CI)]=1.40(1.05-1.88)；GG，P=0.378，OR[95%可信区间(CI)]=0.88(0.66-1.17)。其中GA基因型在慢性HBV感染中有升高的趋势，但经Bonferroni校正后，两组患者之间的差异无统计学意义。
　　（3）单体型分析比较，两个多态位点通过 SHEsis软件进行单倍体构建，其构成的单倍体在两组之间均无统计学差异。PC值分别为 AA，PC=0.387，OR(95%CI)=1.24(0.76-2.02)；AG，PC=0.781，OR(95%CI)=1.04(0.84-1.29)；GA，PC=0.387，OR(95%CI)=0.92(0.73-1.14)。
　　结论：中国汉族人群中IL-10R基因的tag SNP rs2228055的多态GG型可能是HBV感染发病机制中的重要致病基因型，在HBV感染后的慢性化进程中发挥保护作用，IL-10R rs2228055与慢性HBV感染可能具有相关性。

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1引言

2 材料与方法

2.1研究对象

2.2 实验方法

2.3选择多态性位点

2.4 设计引物

2.5 SNaPshot多重单碱基延伸反应:

2.6 统计学处理

2.7 实验室中的质量控制和收集资料

3 结果

3.1 研究对象的一般资料

3.2 两组患者IL-10R多态位点的基因型及等位基因频率的分布

3.3 IL-10R基因2个多态位点的单体型频率比较

3.4 两个位点的连锁不平衡分析（Linkage disequilibrium LD）

4.讨论

4.1免疫及遗传因素在慢性乙型肝炎形成过程中发挥重要作用

4.2 IL-10R的基因多态与慢性乙型肝炎发生的关系

4.3 本研究的结果与以前研究结果的比较以及对结果的解释

4.4基因多态性研究对疾病诊疗的意义

4.5本研究的不足之处

4．6 本实验的创新点

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述:各类细胞因子的单核苷酸多态性和HBV感染转归的相互关系