HME抑制胃癌血管生成及其作用途径

摘要

目的：通过检测胃癌组织及癌旁组织中巨噬细胞金属弹力酶（Human macrophage metalloelastase，HME）、血管抑素（Angiostatin，AS）以及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)的表达，明确人胃癌组织中HME与AS及MCP-1的关系，再结合患者完整的临床病理随访资料，探讨其临床意义。构建含目的基因巨噬细胞金属弹力酶（human macrophage metalloelastase，HME）的重组质粒pEGFP-Cl-HME为进一步探讨HME抑制胃癌的机制奠定基础。
　　方法：采用免疫组化SP法检测胃癌组织30例和癌旁组织石蜡标本30例中的HME、AS及MCP-1蛋白的表达情况，并分析HME与MCP-1、AS的相关性及与临床病理的关系。然后从人体胃癌组织中提取RNA，采用RT-PCR的方法扩增HME编码基因的结构域Ⅰ和Ⅱ的 cDNA片段，产物纯化后克隆入 PGEM-T载体中，用限制性内切酶酶切分析和DNA序列的分析鉴定后再将基因片段克隆入真核细胞表达载体pEGFP-C1中并进行双酶切及PCR鉴定。
　　结果：胃癌组织中HME、AS及MCP-1蛋白的表达阳性率分别为66.7％(20/30)、73.3%(22/30)和80.0%(24/30)。而在胃癌旁组织中分别为10%(3/30)、16.7%(5/30)和16.7%(5/30),三者在胃癌组织中的阳性表达显著高于癌旁组织，其差异有统计学意义(P<0.05)。HME的阳性表达与胃癌的分化程度，血管浸润呈正相关，与其他临床病理参数无明显相关；AS的阳性表达与肿瘤的大小、浸润程度、血管浸润、淋巴及远处转移呈负相关，与其他临床病理参数无明显相关；MCP-1的表达与患者的肿瘤的肿瘤大小、浸润深度、肿瘤分期、淋巴转移、远处转移有关，与其他临床病理参数无明显相关。胃癌组织中HME与AS蛋白的阳性表达存在关联性(列联系数r=0.570，P<0.05). HME与MCP-1在胃癌组织中的阳性表达无相关性(列联分析r=0.115，P>0.05).人HME基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pEGFP-cl质粒中，用BamHI和KpnI双酶切后产生两个大小为6.1kb和1.4kb左右的条带，与预期的基本一致,pEGFP-C1-HME核苷酸序列测序结果表明与人HMEcDNA序列碱基基本符合。
　　结论：HME、AS及MCP-1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织，三者与胃癌的发生、发展、浸润、移密切相关，这可能为胃癌的早期诊断、预后判断及分子靶标治疗等有重要的意义。成功构建pEGFP-C1-HME的真核表达载体，为下一步转染入胃癌细胞，进一步探讨胃癌的发生机制奠定基础。

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HME抑制胃癌血管生成及其作用途径

1.前言

2.材料和方法

3.结果

4.讨论

5.结论

6.参考文献

第二部分重组质粒的构建

1． 前言

3. 材料和方法

4. 结果

5. 讨论

6. 参考文献

附录

致谢

综述: 基质金属蛋白酶（MMPs）与肿瘤的相关研究进展