IHC检测非小细胞肺癌患者ALK融合基因表达异常探讨

摘要

目的：以反转录聚合酶链反应（reverse transcription–polymerase chain reaction，RT-PCR）作参照，探索免疫组化（immunohistochemistry，IHC）检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者组织标本间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）融合基因表达异常的方法及准确性，探讨经济可行的筛查ALK阳性患者的方法及观察ALK阳性患者的临床病理特征。
　　方法：收集NSCLC患者石蜡标本234例，使用兔单克隆D5F3抗体（Cell Signaling Technology公司）行ALK蛋白免疫组化检测合格，对其中阳性标本采用RT-PCR验证。
　　结果：
　　1.234例NSCLC患者组织标本检测ALK免疫组化检测融合基因蛋白表达阳性率为8.97％（21/234），经RT-PCR检测验证后突变率为5.98%（14/234）；
　　2. NSCLC患者ALK突变与组织学类型、年龄、分期相关（P＜0.05），与性别、吸烟史、肿瘤分化程度无关；
　　3.21例病例进行RT-PCR验证，IHC与RT-PCR符合率随IHC阳性程度的增加递增。IHC1+时两者符合率为0，当IHC3+或组织化学评分>120时，两者符合率为100%。
　　结论：
　　1. NSCLC患者ALK突变在腺癌、年轻和分期晚的人群中高发，与性别、吸烟史、肿瘤分化程度无关。
　　2.尽管免疫组化检测ALK融合基因蛋白表达存在一定假阳性，但当IHC3+或组织化学评分>120时与其它确证手段一致性高具有诊断价值，是较可靠的ALK筛查手段。
　　3. IHC筛查及随后RT-PCR再确证是发现ALK阳性肺癌经济可行的组合之一。

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1引言

2材料与方法

2.1标本来源

2.2 主要试剂

2.3标本处理

2.4 免疫组化方法检测 ALK 蛋白的表达

2.5 DNA和RNA双提取

2.6 EML4-ALK融合基因检测

2.7 EGFR基因检测

2.8 统计学方法

3 结果

3.1 ALK基因IHC阳性和RT-PCR阳性两者符合率

3.2 ALK基因阳性肺癌患者临床数据特点

3.3 ALK基因阳性肺癌患者病理学特点

3.4 ALK融合基因和EGFR基因共存现象

4 讨论

5 结论

参考文献

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致谢

综述: 非小细胞肺癌患者ALK基因突变 研究进展