辛伐他汀改善高脂饮食引起的肾脏损伤的机制研究

摘要

目的：
　　1.观察高脂饮食（HFD）能否诱导SD大鼠肾脏发生内质网应激(ERS)及病理学变化，以及辛伐他汀（SIM）是否通过改变大鼠体内脂联素及其受体的表达来改善大鼠肾脏的内质网应激。
　　2.研究棕榈酸（PA）是否诱导人胚肾上皮细胞（HEK293T）产生内质网应激(ERS)及在药物辛伐他汀（SIM）干预下是否通过脂联素受体的上调表达激活AMPK与PPARα通路起到保护作用。
　　方法：
　　1.体内实验部分：将大鼠随机分为正常饮食组（SCD）、高脂饮食组（HFD）和高脂饮食加辛伐他汀疗组（HFD+ST），用5个月高脂饮食建立SD大鼠高脂血症模型，辛伐他汀灌胃治疗2月。每周称量大鼠体重，实验结束后测定血清生化指标HDL-C、LDL-C、TG、TC；HE染色观察肾脏组织病理学改变，Masson染色检测肾脏胶原纤维变化；油红O染色检测肾脏脂质沉积；定量Q-PCR分析大鼠肾脏中CHOP、GRP78及Adiponectin基因在各组的表达情况；RT-PCR分析各组肾脏组织中炎症因子IL-6及TNF-α表达变化；Western blot法检测内质网应激标志物CHOP、GRP78、IRE1α、AdipoR1、AdipoR2、PPARα、AMPK的蛋白表达以及p-AMPK的变化；免疫组化实验检测CHOP、GRP78、AdipoR1、AdipoR2蛋白的表达。
　　2.体外实验部分：将培养的HEK293T细胞分为正常对照组（CON），棕榈酸组（PA），棕榈酸+辛伐他汀干预组（PA+ST），正常对照+AMPK激动剂（CON+AICAR），棕榈酸+AMPK激动剂组（PA+AICAR），正常对照+PPARα激动剂（CON+FF），棕榈酸+PPARα激动剂组（PA+FF），四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度棕榈酸和辛伐他汀组的细胞增殖；各组细胞进行HE染色；Western blot法检测内质网应激标志物CHOP、GRP78、IRE1α、AMPK、PPARα、AdipoR1、AdipoR2的蛋白表达以及p-AMPK的变化；免疫组化分析CHOP、GRP78、IRE1α、AdipoR1、AdipoR2的表达，结合Western blot分析相关蛋白在各组细胞中的定位及定量表达变化。
　　结果：
　　1.体内实验部分：5月HFD饮食后，与SCD组相比：①HFD组大鼠体重明显高于SCD组；②HFD组大鼠血清TC、TG、LDL-C显著增高，HDL-C明显降低；③HE及Masson染色显微观察显示：HFD组肾小球细胞数增多，系膜细胞与系膜基质增多，进而肾小管上皮细胞出现水肿、空泡变性，肾小球体积增大，肾小管出现大量蓝染胶原纤维；④油红染色显示HFD组肾脏脂质沉积显著增加，并达显著差异；⑤CHOP、GRP78、IRE1α蛋白表达明显高于SCD组，CHOP、GRP78的基因表达也明显高于SCD组，p-AMPK、PPARα表达显著降低；⑥AdipoR1、AdipoR2蛋白表达是下降的且与脂联素基因表达呈正相关；⑦SIM灌胃治疗2月，与HFD组相比，显著降低大鼠体重，逆转血脂水平改变，明显改大鼠肾脏病理学变化，CHOP和GRP78基因表达显著降低，各蛋白表达CHOP、GRP78、IRE1α明显降低，p-AMPK、PPARα、AdipoR1、AdipoR2显著增加；⑧IL-6及TNFα炎症因子表达降低。
　　2.体外实验部分：与CON组相比，①不同浓度PA使HEK293T活力明显降低，以0.5 mmol/L PA作用24 h最明显；②PA显著诱导CHOP、GRP78基因表达，降低AdipoR1、AdipoR2、Adiponectin基因的表达；③CHOP、GRP78、IRE1α表达显著增加，p-AMPK、PPARα、AdipoR1、AdipoR2表达显著降低；④用AMPK激动剂AICAR和PPARα激动剂FF预处理PA组，与单纯PA组相比，AMPK与PPARα表达增加；⑤HE染色表明PA处理的细胞出现皱缩，免疫组化检测表明CHOP、GRP78、IRE1α呈上升趋势，AdipoR1、AdipoR2蛋白表达下降；⑥SIM预处理PA组后，CHOP、GRP78、IRE1α表达下降，内质网应激缓解，AdipoR1、AdipoR2蛋白表达上升。
　　结论：
　　1.5月的高脂饮食可以成功构建大鼠高脂血症模型和诱导大鼠肾脏发生内质网应激反应，辛伐他汀可明显缓解上述症状，其机制可能是通过上调脂联素及其受体R1、R2的表达、进一步激活AMPK和PPARα通路来减弱内质网应激，降低炎症因子的表达而起到保护作用。
　　2.棕榈酸可抑制HEK293T增殖，引起内质网应激，辛伐他汀可能是通过脂联素受体R1、R2激活AMPK和PPARα通路抑制内质网应激而起到保护作用。

目录

声明

英文缩略词表Abbreviation

第一部分 高脂饮食诱导SD大鼠肾脏功能损伤及辛伐他汀通过调控脂联素及其受体表达的干预作用

前言

2 材料

3 方法

4 结果

5 讨论

6 结论

参考文献

第二部分 棕榈酸诱导人胚肾上皮细胞内质网应激及辛伐他汀通过上调脂联素R1、R2受体表达激活AMPK与PPARα通路的保护机制研究

1. 前言

2．材料

3．结果

4讨论

5. 结论

参考文献

附录

致谢

综述:脂毒性对慢性肾病的影响