敲减长链非编码RNA ATB抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

摘要

目的：
　　采用shRNA ATB敲减胶质瘤U87细胞中ATB后，研究其对人胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。
　　方法：
　　本研究采用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测ATB在人胶质瘤细胞系U87与正常人脑胶质细胞HEB中的表达情况。并在此基础上构建了ATB表达载体shRNA ATB质粒，利用构建成功的质粒转染人胶质瘤U87细胞株，获取新的U87细胞，该细胞具有低表达ATB的特点。应用MTT法检测敲减ATB后对U87细胞增殖的影响；应用细胞克隆实验检测敲减ATB后对U87细胞克隆增殖能力的影响；应用Transwell实验检测敲减ATB后对U87细胞迁移和侵袭能力的影响。应用Western blot法检测敲减ATB后PCNA蛋白表达情况。
　　结果：
　　qRT-PCR结果显示，人脑胶质瘤细胞系U87中ATB表达水平与正常人脑胶质细胞 HEB相比，较之明显上调（P<0.01）；与 shRNA正常对照组相比，转染了shRNA-ATB的实验组细胞能的ATB水平显著较少（P<0.01）；细胞克隆实验显示shRNA-ATB实验组细胞克隆形成能力较 shRNA对照组明显降低（P<0.01）； MTT结果表明敲减细胞内ATB后细胞增殖的速率较shRNA对照组有明显的较低（P<0.01）。Transwell实验进一步验证了敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后，细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制（P<0.01）。此外，Western blot实验进一步验证敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后，可使PCNA表达降低。
　　结论：
　　靶向敲减U87细胞中的ATB后能够抑制其增殖、迁移和侵袭，表明ATB基因可能是胶质瘤患者的潜在治疗靶点。

目录

声明

英文缩略词表

1.前言

2.1 细胞株

2.2 主要试剂及材料

2.3 主要仪器设备

2.4 试剂配制

2．5．1细胞中总RNA提取

2.5.2 qRT-PCR检测实验

2.5.3细胞实验基本操作

2.5.4 细胞转染

2.5.5 细胞克隆形成实验

2.5.6 MTT实验

2.5.7 Transwell小室(不铺基质胶)检测肿瘤细胞迁移能力实验

2.5.8 Transwell小室（铺基质胶）检测肿瘤细胞侵袭能力实验

2.5.9 shRNA对照组与shRNA-ATB实验组细胞总蛋白的提取

2.5.10 BCA法测定蛋白浓度

2.5.11 白免疫印迹实验（Western blot）

2.6 实验统计处理

3.1 长链非编码RNA ATB在人脑胶质瘤U87细胞中是高表达

3.2 敲减胶质瘤细胞内的ATB基因后能抑制胶质瘤细胞的增殖

3.3敲减细胞内的ATB基因后能使胶质瘤细胞的迁移能力降低

3.4敲减细胞内的ATB基因后能使胶质瘤细胞的侵袭能力降低

3.4敲减细胞内的ATB基因后能使PCNA蛋白表达降低

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述:长链非编码 RNA 在恶性肿瘤形成和进展中的作用