多态性蛋白Mad2折叠与功能的单分子荧光研究

目录

声明

第一章 绪论

1.1 多态性蛋白研究背景及意义

1.1.1 多态性蛋白家族简介

1.1.2 多态性蛋白的识别和表征

1.2 纺锤体检查点研究现状

1.2.1 纺锤体检查点的分子组成

1.2.2 纺锤体检查点的分子机制

1.2.3 纺锤体检查点异常与肿瘤

1.3 Mad2蛋白简介

1.3.1 Mad2 蛋白的结构与功能

1.3.2 Mad2两种不同构象转变的研究

1.3.3 Mad2与 Cdc20 相互作用的研究

1.4 单分子荧光共振能量转移技术

1.4.1 单分子荧光共振能量转移技术的原理

1.4.2 sm-FRET用于研究蛋白质结构及蛋白质间的相互作用

1.4.3 利用全内反射荧光显微镜技术（TIRF）检测构象变化

1.5 本课题研究的主要内容

第二章 Mad2 突变体的构建、表达纯化与荧光双标记

2.1 前言

2.2 实验材料与试剂

2.2.1 实验材料

2.2.2 实验仪器

2.2.3 实验试剂

2.3 实验内容与方法

2.3.1 Mad2突变体的构建

2.3.2 Mad2突变体的表达、纯化

2.3.3 Mad2突变体蛋白的初步表征

2.3.4 Mad2不同突变体蛋白的荧光双标记

2.4 实验结果与讨论

2.4.1 Mad2突变体的构建

2.4.2 Mad2突变体蛋白的表达、纯化

2.4.3 Mad2突变体蛋白的初步表征

2.4.4 Mad2不同突变体蛋白的荧光双标记

2.5 本章小结

第三章 利用单分子荧光技术研究Mad2 蛋白的折叠/解折叠机理

3.1 前言

3.2 实验材料与试剂

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验仪器

3.2.3 实验试剂

3.3 实验内容与方法

3.3.1 Mad2两种不同构象间的相互转变

3.3.2 Mad2不同突变体的盐酸胍变性实验

3.3.3 Mad2不同突变体的复性实验

3.3.4 利用 TIRF技术研究 Mad2蛋白构象变化方法的建立

3.4 实验结果与讨论

3.4.1 Mad2两种不同构象间的相互转变

3.4.2 Mad2不同突变体的盐酸胍变性实验

3.4.3 Mad2不同突变体的复性实验

3.4.4 利用 TIRF技术研究 Mad2蛋白构象变化方法的建立

3.5 本章小结

第四章 Mad2 与其配体Cdc20111-138相互作用的研究

4.1 前言

4.2 实验材料与试剂

4.2.1 实验材料

4.2.2 实验仪器

4.2.3 实验试剂

4.3 实验内容与方法

4.3.1 Mad2与 Cdc20111-138相互作用的单分子荧光研究

4.3.2 不同浓度条件下 Mad2与 Cdc20 相互作用的单分子荧光研究

4.3.3 Mad2与 Mad2 间相互作用的单分子荧光研究

4.4 实验结果与讨论

4.4.1 Mad2与 Cdc20111-138相互作用的单分子荧光研究

4.4.2 不同浓度条件下 Mad2与 Cdc20 相互作用的单分子荧光研究

4.4.3 Mad2与 Mad2 间相互作用的单分子荧光研究

4.5 本章小结

结 论

参考文献

附 录

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致 谢