高效价猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白多克隆抗体的制备及初步应用

目录

声明

英文缩略词表

前 言

1.1 猪圆环病毒的流行现状与防控

1.2 PCV2 的分子生物学特征

1.2.1 猪圆环病毒的结构和特征

1.2.2 猪圆环病毒主要开放阅读框及其编码蛋白

1.2.3 猪圆环病毒的复制

1.3 猪圆环病毒的检测

1.3.1 病毒分离

1.3.2 PCR 检测方法

1.3.3 酶联免疫吸附实验检测（ELISA）

1.3.4 间接免疫荧光法检测（IFA）

1.3.5 间接免疫组化法检测（IHC）

1.4 圆环病毒抗体的研究进展

1.5 本研究目的意义

2材料与方法

2.1 主要仪器设备

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.3.1 PCV2 Cap蛋白氨基酸序列分析与目的基因扩增

2.3.2 DNA琼脂糖凝胶纯化与回收

2.3.3 感受态细胞的制备

2.3.4 重组表达载体构建与鉴定

2.3.5 重组质粒的小量提取

2.3.6 重组蛋白的诱导表达

2.3.7 SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色

2.3.8 免疫印迹

2.3.9 重组蛋白的诱导表达及表达条件优化

2.3.10 重组蛋白的纯化

2.3.11 蛋白浓度测定

2.3.12 纯化蛋白的透析浓缩

2.3.13 实验动物免疫与血清采集

2.3.14 酶联免疫吸附实验

2.3.15 辛酸-硫酸铵沉淀法纯化血清

2.3.16 细胞的培养 、复苏以及冻存

2.3.17 PCV2病毒感染的细胞和动物模型

2.3.18 细胞间接免疫荧光

2.3.19 组织切片与免疫化学分析

2.3.20 PCV2临床毒株的分离与鉴定

3结果与分析

3.1 PCV2 Cap蛋白原核表达载体的构建与鉴定

3.2 Cap 蛋白的可溶性诱导表达及条件优化

3.3 重组蛋白的纯化及检测

3.4 多克隆抗血清效价的检测

3.5 抗血清特异性检测

3.6 抗血清的纯化与特异性检测

3.7 应用抗 Cap 多克隆抗体进行间接免疫荧光和免疫组化检测

3.8 抗 Cap 多克隆抗体的临床应用

4讨论

5结论

参 考 文 献

附 录

致 谢

攻读学位期间发表论文情况