高含量内源性亚油酸对耶氏解脂酵母细胞的毒性研究

目录

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第一章 绪论

1.1多不饱和脂肪酸

1.1.1 概述

1.1.2 多不饱和脂肪酸的应用

1.2 亚油酸

1.2.1 亚油酸的简介

1.2.2 亚油酸的应用

1.2.3 亚油酸毒性作用机制的研究

1.3 耶氏解脂酵母简介

1.4 Δ12-脂肪酸脱氢酶

1.5 维生素C的抗氧化作用研究现状

1.6 立题依据和主要研究内容

1.6.1 立题依据

1.6.2 研究内容

第二章 高含量内源性亚油酸对耶氏解脂酵母细胞的影响

2.1 前言

2.2 实验材料

2.2.1 菌株与质粒

2.2.2主要试剂

2.2.3 主要培养基配方及其他试剂配方

2.2.4主要仪器

2.3 实验方法

2.3.1 Δ12-脂肪酸脱氢酶基因的提取和克隆

2.3.2 Δ12-脂肪酸脱氢酶基因片段的回收

2.3.3 质粒DNA的提取

2.3.4 目的片段与表达载体pINA1312和pINA1292的连接

2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的制备

2.3.6 转化及转化子的鉴定

2.3.7 耶氏解脂酵母感受态细胞的制备

2.3.8 乙酸锂法转化

2.3.9 重组酵母基因组的提取及其转化子的鉴定

2.3.10 耶氏解脂酵母重组菌株和对照菌株的发酵培养

2.3.11 生物量的测定

2.3.12 发酵液中葡萄糖浓度和NH4+含量的测定

2.3.13 油脂的提取与含量的测定

2.3.14 生存力测定及细胞形态、菌落形态观察

2.3.15 数据处理方法

2.4 结果与分析

2.4.1 Δ12脂肪酸脱氢酶基因的克隆及质粒表达载体的构建

2.4.2 Δ12-脂肪酸脱氢酶基因在耶氏解脂酵母中的构建及转化子的筛选

2.4.3 Δ12-脂肪酸脱氢酶基因过表达对耶氏解脂酵母生物量的影响

2.4.4 Δ12脂肪酸脱氢酶基因过表达对葡萄糖浓度和NH4+浓度的影响

2.4.5 Δ12-脂肪酸脱氢酶基因过表达对耶氏解脂酵母油脂积累和脂肪酸组成的影响

2.4.6 Δ12-脂肪酸脱氢酶基因过表达对耶氏解脂酵母细胞形态和数量的影响

2.5 讨论与小结

第三章 外源油脂和维生素C缓解亚油酸对细胞的毒性作用

3.1前言

3.2 实验材料

3.2.1 实验菌株

3.2.2 培养基配方及其他试剂配方

3.2.3 主要试剂

3.2.4 主要仪器

3.3 实验方法

3.3.1 分别添加鱼油和菜籽油进行发酵培养

3.3.2 添加维生素C进行发酵培养

3.3.3 酵母细胞中丙二醛（MDA）的测定

3.3.4 酵母细胞中活性氧（ROS）的测定

3.3.5 酵母细胞内过氧化氢酶（CAT）活性检测

3.3.6 酵母细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性检测

3.3.7 数据处理

3.4 结果与分析

3.4.1 添加鱼油或菜籽油对酵母生长和代谢的影响

3.4.2 添加维生素C对酵母生长影响

3.4.3 添加维生素C对酵母细胞内丙二醛（MDA）含量的影响

3.4.4 添加维生素C对酵母细胞中活性氧（ROS）水平的影响

3.3.5 添加维生素C对酵母细胞内过氧化氢酶（CAT）活性的影响

3.3.6 添加维生素C对酵母细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响

3.5 讨论与小结

第四章 结论与展望

4.1 结论

4.2 展望

参考文献

研究生期间主要成果

致谢